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肌氨酸氧化酶

英文名称：SOX

CAS：9029-22-5

货号：HH0301-01

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中文：肌氨酸氧化酶

英文：SOX

CAS：9029-22-5

分子式：45 kDa (SDS-PAGE)

纯度：≥90%

货期：24h

货号：HH0301-01

规格：3ku

中文同义词：肌氨酸氧化酶;肌氨酸氧化酶;肌氨酸氧化酶/SAO;

英文同义词：SAO;SOX;

技术指标

外观:黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度: ≥90%; 比活性: ≥15 U/mg 酶粉;过氧化氢酶:≤0.03%; 肌酐酶: ≤0.01%; 肌酸酶: ≤0.01%; ATP 酶: ≤0.005%

酶学性质

来源:微生物；分类: EC 1.5.3.1；分子量: 45 kDa(SDS-PAGE)；等电点: 5.3；Km值: 5.6×10-3 M(Sarcosine)；抑制剂: SDS，Zn2+，Cd2+；最适pH: 8.0；最适温度：50℃；pH稳定性：7.0-9.5(25℃,16 h)；热稳定性：50℃ 以下稳定(pH 7.5,30 min)；稳定性：-25～-15℃ 静置保存 12 个月保持 90% 以上活性。

用途：用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。

活性测定方法：

反应生成的醌亚胺（Quinoneimine dye）可在 555 nm 检测。

酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化生成1μmol H2O2所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.2 M Tris-HCl 缓冲液，pH 8.0。

试剂II：1.0 M 肌氨酸溶液（8.9 g 肌氨酸溶解到 100 mL UP 水中）。

试剂III：1 kU/mL POD。

试剂IV：50 mM 4-AA溶液（1.016 g 4-AA溶于100 mL UP水）。

试剂V：50 mM TOOS溶液（1.657 g TOOS溶于100 mL UP水）。

酶稀释液：20mM Tris-HCl，pH 8.0，2mMEDTA。

按如下配制反应混合物：试剂I：5 mL；试剂II：10 mL；试剂III：0.25 mL；试剂IV：1.5 mL；试剂V：1.5 mL；双蒸水：31.75 mL；共50 mL，可用于50次反应。

操作步骤

1. 向1 mL比色皿中加入1 mL反应混合物。

2. 37℃ 温浴 5 min。

3. 向反应混合物中加入 20μL 待测酶液，混匀。

4. 37℃ 反应，在 555 nm 检测样品1 min内的吸光度变化（ΔAs）

*用酶稀释液替代酶液，其它步骤相同，所得溶液吸光度为空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb

活力计算

1.020：反应液总体积（mL）；

0.020：酶液体积（mL）；

t：反应时间（1min）；

df：稀释倍数；

1/2：1摩尔过氧化氢生成1/2摩尔醌亚胺染料；

1.0：光路长度(cm)；

C：酶浓度(mg/mL)；

39.2：标准反应条件下，生色基团在 555 nm 处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。

Q:肌氨酸氧化酶活性测定？

制备肌氨酸氧化酶的纯品用奥林巴斯AU5400生化仪测定活性，酶活可达30000U/L，且‑20℃甘油冻存6个月，酶活基本保持不变。上述制备肌氨酸氧化酶的方法可作为诊断试剂，用于肌氨酸检测试剂盒的研制。

Q:肌氨酸氧化酶的纯化？

1.取400ml培养液3000rpm离心分离10分钟后收集菌体，肌氨酸氧化酶菌体重悬于10ml蛋白提取缓冲液中(50mMNa‑PO4，pH8.0，500mMNaCl，10mMImidazle)，15MPa高压破菌，12,000rpm，4℃离心10min，上清液与Ni‑NTA冰上孵育1小时；2.过Ni‑NTA亲和层析柱，用蛋白提取buffer洗涤，最后用250mMImidazle洗脱，收集洗脱液。3.蛋白洗脱液过G50柱去除Imidazle，这样可以得到95％以上纯度的SAO。4.肌氨酸氧化酶活性测定：制备肌氨酸氧化酶的纯品用奥林巴斯AU5400生化仪测定活性，酶活可达30000U/L，且‑20℃甘油冻存6个月，酶活基本保持不变。

Q:肌氨酸氧化酶的表达？

1.肌氨酸氧化酶以BL21(DE3)为宿主菌，将SAOpRSF进行转化，挑取单菌落于3mlLB培养基培养过夜；2.以1∶500比例将菌液转接至400mlLB培养基，恒温在37℃，230rpm培养至OD600＝0.4‑0.6；3.加IPTG诱导，IPTG诱导终浓度为0.5mM，保持25℃条件下表达8小时后收菌。BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。普通大肠杆菌没有t7RNA聚合酶，所以不能表达那些载体上的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于BL21的染色体上，就叫BL21(DE3)。

Q:肌氨酸氧化酶的制备？

一种制备肌氨酸氧化酶的方法。这种方法的原理主要在于：将优化后的肌氨酸氧化酶编码基因插入构建好的表达载体，在大肠杆菌中诱导其高效表达，该方法具体为：肌氨酸氧化酶表达载体的构建：通过基因工程手段利用NdeI和XhoI位点将其克隆至PRSFDuet载体内，并转化大肠杆菌TOP10菌株，挑取数个转化克隆提取质粒，通过限制性内切酶酶切鉴定目的基因是否插入载体，选取插入目的基因的质粒进行DNA序列测定，结果表明肌氨酸氧化酶基因成功克隆至pRSFDuet载体内，将其命名为SAOpRSF。

Q:肌氨酸氧化酶的作用？

肌氨酸氧化酶可以氧化肌氨酸成甘氨酸和甲醛。它和肌酐酶和肌酸酶一起用于肌酐酶法检测。本品仅供科研使用。

Q:肌氨酸氧化酶应用？

肌氨酸氧化酶简称SOX，是肌酐降解代谢途径中的第三个酶，能专一性地催化底物肌氨酸生成甘氨酸。肌氨酸氧化酶在临床诊断中有广泛的应用，通过肌氨酸氧化酶偶联肌酐酶、肌酸酶测定血清中肌酐的含量，是判断肾脏功能的一个重要参考指标，在医药领域具有良好的应用前景。

Q:肌酸酶应用？

肌酸酶与肌氨酸氧化酶混合可用于测定不同pH值、温度、酶比和缓冲液浓度下的肌酸水平。也可以通过使用离心分析仪来测定血浆肌酐水平。

Q:肌酐酶测定方法有哪些？

目前肌酐酶法的测定主要有两种，一种是监测肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶变化的酶动力学测定，另一种为肌酐氨基水解酶偶联肌氨酸氧化酶和过氧化物酶发生ChemicalbookTrinder反应的酶动力学测定。其中，后者由于试剂价格相对较低，不受血氨和其他干扰物的影响，目前已有大量的商品试剂盒供应。