药企必看！2025 药典 HCD 检测再升级，如何让检测更加“稳、准、快”？

在生物制药领域，CHO 细胞是应用最广泛的细胞系，可用于生产单抗、ADC 药物、干扰素、疫苗等药物。然而，由于生物制品生产工艺的特殊性，CHO 细胞生产的生物制品不可避免地会有来自于宿主细胞的残留杂质 DNA（Host Cell DNA, HCD）。这些来自于宿主细胞的残留 DNA 在进入人体后会存在免疫原性、感染性以及致瘤性等潜在风险。因此，在生物药质量控制中，对生物制品中宿主细胞的残留 DNA 进行检测，是药企必须跨越的 “合规红线”。

而生物制品种类多样，DNA 残留检测适配性极为关键。随着 2025 版《中华人民共和国药典》实施临近，检测标准再升级，如何快速适配法规、确保数据可靠？今天带你深度解析 CHO 细胞残留 DNA 检测的法规变化与检测难点！

一、药典变化解读

HCD检测的趋势-qPCR法

2025 版中国药典（ChP 2025）在生物制品质量控制方面进一步强化了宿主细胞 DNA 残留（HCD）检测的要求，尤其针对 CHO 细胞表达的重组蛋白药物（如单抗、ADC 等），主要变化如下：

1.2025版中国药典对宿主细胞DNA（HCD）残留检测要求的变化

新增多个单抗药物的HCD检测要求

注射用曲妥珠单抗、英夫利西单抗、阿达木单抗、贝伐珠单抗、利妥昔单抗等，以及部分疫苗类（如 Sabin 株脊髓灰质炎灭活疫苗）均明确要求采用通则 3407 第三法（定量 PCR 法）进行 HCD 检测。

抗体偶联药物（ADC）纳入监管

2025 版新增 “人用抗体偶联药物制品总论”，要求 ADC 类产品同样需符合 “人用重组单克隆抗体制品总论” 及药典相关各论的要求，需要对宿主细胞 DNA 残留等杂质进行相关检测把控，进一步扩大生物药的监管范围。

残留限值更严格

如贝伐珠单抗、利妥昔单抗要求 ≤10 pg/mg，部分生长激素类产品要求 ≤1.5 ng/mg。

检测方法更倾向qPCR法

2020 版药典虽已收录 DNA 探针杂交法、荧光染色法、定量 PCR 法，但 2025 版在多个新增药物中明确指定使用 qPCR 法，表明该方法将成为行业主流趋势。

2.2025版 vs 2020版药典HCD检测要求对比

二、痛点分型

不同类型生物制品的 CHO HCD 检测瓶颈

疫苗、抗体药、ADC（抗体偶联药物）、重组蛋白等 CHO 细胞表达产物的应用日益广泛。然而，不同药物类型因生产工艺和产品特性的差异，对 HCD 检测提出了截然不同的挑战：

1.重组蛋白疫苗领域

CHO细胞表达与疫苗纯化工艺

CHO 细胞表达病毒样颗粒（VLP）或重组抗原（如新冠病毒 S 蛋白），培养上清经切向流过滤（TFF）浓缩 5-10 倍，降低后续处理体积。浓缩液经阴离子交换层析（AEX，如Q Sepharose XL）捕获目标抗原，利用梯度 NaCl 洗脱去除宿主 DNA 及 HCP。经过 Superdex 200 凝胶过滤层析去除聚集体及小分子杂质，提升抗原均一性（单体含量>95%）。最后完成灭活与制剂，利用 β-丙内酯（0.05% v/v）或低 pH 处理灭活病毒，添加糖类稳定剂（如蔗糖、海藻糖）后分装冻干，确保疫苗稳定性。

疫苗难点：高糖干扰

重组蛋白疫苗中常添加糖类稳定剂（如蔗糖、海藻糖），高糖浓度（5%-10%）会增加样本粘度，阻碍 DNA 释放效率，并可能干扰荧光信号检测。

2.抗体药物领域

CHO细胞表达流程

抗体药生产中，CHO 细胞经转染后，在生物反应器中通过悬浮培养扩增（培养基含葡萄糖、氨基酸及微量元素），目标抗体分泌至培养上清。培养末期通过离心或深层过滤（如使用 0.2 μm 滤膜）澄清收获液，去除细胞碎片。澄清液经 Protein A 亲和层析柱（如 MabSelect SuRe），抗体通过 Fc 段与 Protein A 特异性结合，洗脱缓冲液（pH 3.8 醋酸钠）高效解离抗体，回收率>95%。接着低 pH（pH 3.8）孵育 30-60 分钟灭活包膜病毒，随后通过阳离子交换层析（CEX，如Capto S）去除聚集体及宿主蛋白（HCP），阴离子交换层析（AEX，如 Capto Q）清除残留 DNA 及内毒素，完成病毒灭活和精纯。最后超滤浓缩至目标浓度，经纳米过滤（20 nm 孔径）去除潜在病毒颗粒，最终获得高纯度抗体原液。

抗体药难点：高浓度蛋白干扰

抗体原液蛋白浓度可达 100 甚至 200 mg/mL，高浓度蛋白可能通过静电或疏水作用抢占磁珠结合位点；或变性聚集、包裹宿主 DNA 形成复合物，阻碍 DNA 释放到溶液中；或导致溶液粘稠，磁珠难以均匀分散。这些均可能影响 DNA 回收率，造成检测结果波动大。

3.抗体偶联药物（ADC）领域

CHO细胞表达与ADC制备工艺

首先是抗体生产与纯化，CHO 细胞表达裸抗（如 IgG1），经 Protein A 亲和层析及离子交换层析纯化后，获得高纯度抗体中间体（HCP<100 ppm，DNA<10 pg/mg）。接着进行连接子与毒素偶联，抗体经还原或酶切暴露巯基（如链间二硫键），与连接子-毒素复合物（如 MC-VC-PABC-MMAE）在 pH 7.0-8.0 缓冲液中偶联，DAR 值（药物抗体比）控制在 2-4 以平衡药效与毒性。偶联反应后，部分工艺需通过低 pH 处理（pH 4.0）促进连接子裂解或毒素释放（如溶酶体模拟环境）。采用疏水层析（HIC，如Butyl Sepharose）去除未结合毒素，再经切向流过滤（TFF）置换缓冲液并浓缩，最终通过纳米膜过滤确保无菌性，完成偶联后纯化。

ADC难点：特殊pH干扰

ADC 偶联反应中常使用低 pH（3.0-4.0）或高 pH（8.0-9.0）缓冲液以优化连接效率，而残留的极端 pH 条件可能破坏 DNA 完整性（如低 pH 导致片段化），或影响检测试剂的稳定性。

三、解决方案

瀚海新酶提供合规高效的HCD检测方案

客户真实反馈

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