糖基化修饰(N-Glycan)

糖基化修饰是真核生物蛋白最常见的翻译后修饰之一，在内质网表面经糖基转移酶催化，聚糖分子与新生成蛋白质上的天冬酰胺残基通过 N-糖苷键连接，并进入内质网和高尔基体内发生一系列后续加工，其修饰位于 Asn-X-Thr/Ser (X≠Pro) 基序的 N 残基上。

所有真核生物的 N-聚糖都有共同的核心序列：Manα1-3 [Manα1-6] Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAcβ1-N-Asn-X-Ser/Thr，包含三种类型：(1) 高甘露糖型：只有 Man 残基延伸核心。(2) 复杂型：由 GlcNAc 启动延伸核心。(3) 混合型：Man 启动延伸 Manα1-6 臂，GlcNAc 启动延伸 Manα1-3 臂。

糖基化修饰对药物的影响

单抗 N297 位点的 N-糖型与 Fc 效应功能密切相关：去除或降低岩藻糖和 N-乙酰葡萄糖胺可使单抗 Fc 段与 FcγRⅢa (CD16a) 的结合力增加从而增强 ADCC 效应、末端半乳糖含量增加可使单抗 Fc 段与补体 C1q 的结合力增加从而增强 CDC 效应、高甘露糖型 N-糖可结合体内的甘露糖受体通过内吞作用介导单抗的降解从而降低单抗的半衰期、α-半乳糖和羟乙酰神经氨酸两种非人源单糖的存在可能会使单抗产生免疫原性、Fc 上 N-糖高唾液酸化的抗体具有抗炎作用。

复杂蛋白 N-糖修饰的唾液酸化程度较高，唾液酸的缺失可暴露 N-糖链的半乳糖或 N-乙酰葡萄糖胺及甘露糖，半乳糖可与体内细胞尤其是肝细胞上的无唾液酸糖蛋白受体 (ASGPR) 结合，N-乙酰葡萄糖胺以及甘露糖可以和甘露糖受体结合，通过内吞作用介导糖蛋白的降解而降低糖蛋白的半衰期。

上述图表中表述：商业化抗体都包含多种糖型，不同批次的抗体糖型种类和比例会有差异，导致药效出现波动。制备糖型均一性好的抗体，保证各批次产品的性质稳定，具有重要的意义。

N - 糖 检 测

一、N-糖检测的法规要求

N-糖基化修饰对于蛋白生物学功能、半衰期、免疫原性、蛋白溶解性、热稳定性、蛋白酶抵抗性和聚集体具有重要影响，是抗体蛋白生产批间一致性最为重要的指标，药企需要将其纳入质量研究标准和工艺开发放行标准，在细胞克隆筛选、工艺设计和开发、工艺确认、工艺变更中均需考察 N-糖修饰水平的改变。

ICH-Q6B、各国药典和监管机构也均对 N-糖基化定量检测做出了相应要求，2025 年版《中国药典》中 “9405 糖蛋白的糖基化分析指导原则” 和 “3130 N-糖谱测定法” 中详细描述了测定方法与分析方法，确保生物制药产品的质量稳定性。

实验全过程操作时间不超过 1h，无冻干等耗时步骤，不含有氰基硼氢化钠等危害试剂，荧光信号高，全力保证检测结果的准确性及一致性。

三、产品性能

PNGase F酶切效率完全

5 分钟快速酶切方案，CE-SDS 验证完全酶切，所有试剂与质谱兼容。

糖型数据一致

快速荧光标记试剂盒与进口品牌的峰保留时间和峰占比一致，2-AB 试剂盒与药典方法的保留时间和峰占比一致。

线性验证

左图是快速标记试剂盒，以蛋白浓度为横坐标，糖型峰面积为纵坐标，糖型的线性相关系数 R2＞0.99。右图是 2-AB 标记试剂盒，以蛋白量为横坐标，糖型峰面积为纵坐标，糖型的线性相关系数 R2＞0.99。

批次稳定性

试剂盒全组分自研自产，GMP 下严格质量标准生产及质检，保证试剂盒的一致性。

耐用性

样本前处理后放置不同时间段，峰占比检测数据一致。

客户测评

左图是快速标记试剂盒的实测数据对比一致，右图是 2-AB 试剂盒的实测数据对比一致。

四、产品信息

双 重 福 利 活 动

参考文献

1.Lauber, M. A，Yu, Y.-Q，Brousmiche, D. W，Hua, Z，Koza, S. M，Magnelli, P，Guthrie, E，Taron, C. H，Fountain, K. J. Rapid Preparation of Released N-Glycans for HILIC Analysis Using a Labeling Reagent That Facilitates Sensitive Fluorescence and ESI-MS Detection. Anal Chem. 2015, 87 (10), 5401–5409.

2.Cymer F, Beck H, Rohde A, et al. Therapeutic monoclonal antibody N-glycosylation–Structure, function and therapeutic potential[J]. Biologicals, 2018, 52: 1-11.

3.Wijdeven, M.A, et al, Wijdeven, M.A, et al. Enzymatic glycan remodeling-metal free click (GlycoConnect) provides homogenous antibody-drug conjugates with improved stability and therapeutic index without sequence engineering. MAbs, 2022. 14(1): p. 2078466.

内容丨市场部、研发中心

编辑排版丨品牌

审核丨市场部、研发中心

图片丨来源于瀚海新酶