产品概述
肠激酶(Enterokinase，EK)是一种高度特异性丝氨酸蛋白酶，可以专一识别 DDDDK 序列并在赖氨酸残基的 C 端进行切割（K 后面不能是脯氨酸）。重组肠激酶(GMP Grade)是通过大肠杆菌表达，在天然肠激酶轻链片段的基础上进行突变改造（含有 6×His-tag），具有更高的比活和酶切特异性，特别适合多肽类药物的生产制备，例如 GLP-1及其类似物。
产品应用
从N-末端和 Met-N 末端融合蛋白中去除标记肽，使用 DDDDK 作为酶切位点，无残留氨基酸。
运输及保存方法
储存稳定性：-25℃~-15℃条件下保存。
运输稳定性：干冰运输。
单位定义
1U 定义为在 25℃ 12h~16h 之内，将 0.5mg保存于 25mM Tris-HCl (pH8.0)缓冲液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量。
质量控制
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外观 |
澄清、无色至淡黄色液体 |
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纯度（SDS-PAGE） |
≥95% |
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纯度（HPLC） |
≥90% |
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内毒素 |
≤10EU/KU |
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宿主蛋白 |
≤0.01% |
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宿主核酸 |
≤2ng/KU |
使用说明
1.建议反应体系：25mM Tr is-HCl (pH8.0)
2.酶切比例：含Flag 融合蛋白 0.1-1mg/ml (蛋白总量 0.1-1mg)，使用重组肠激酶 0.1-1U
3.反应时间：建议 25℃酶切过夜或是 12h-16h； 4℃下酶切需要增加酶量或者延长酶切时间
4.体系优化：可以对酶切体系进行优化，例如离子强度、缓冲液 pH、融合蛋白浓度、肠激酶用量、酶切温度、酶切时间等。
5.酶切效果验证：使用Flag 抗体检测或是通过 SDS-PAGE、RP-HPLC 等检测手段
6.肠激酶去除方法：本产品含有 His 标签，可使用 Ni 柱亲和层析吸附去除，使用离子交换填料，pH8.0 条件下，肠激酶能够与 DEAE 填料结合，并且在 0.15M NaCl 中能够被洗脱。
注意事项
1.在>200 mM 咪唑，或>200mM NaCI，或>5%甘油条件下，酶切效果受影响，为达理想酶切效果，可将样品进行稀释或者透析，再进行酶切。
2.在咪唑＜100mM，NaCl＜50mM，甘油＜5%，酶的用量与蛋白比例不变。
3.如果体系中含有其它对酶切效率有影响的成分，可以通过透析去除，或者稀释将抑制剂浓度降低，也可以通过增加酶量或者延长酶切时间
