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肌酐检测试剂盒(酶法)

英文名称:Creatinine Kit /Crea
CAS:HOEM0706
货号: HOEM0706-01 HOEM0706-02 HOEM0706-03
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中文:肌酐检测试剂盒(酶法)
英文:Creatinine Kit /Crea
CAS:HOEM0706
纯度:90%
货期:24h
货号:HOEM0706-01
规格:20ml
中文同义词:肌酐检测试剂盒(酶法),肌酐(Cre)检测试剂盒(酶法,抗羟)
英文同义词:Creatinine Kit /Crea

产品名称:肌酐检测试剂盒(酶法)

预期用途:本试剂盒用于体外测定人血清、血浆或尿液中肌酐(CREA)的含量。血浆肌酐浓度反映肾脏损害、肾小球滤过率、尿路通畅性等肾功能,是一项比尿素、尿酸更特异的肾功能指标。肌酐增高:肾病初期肌酐值常不高,直至肾实质性损害,血肌酐值才升高。其值升高 3~5 倍提示有尿毒症的可能,升高 10 倍,常见于尿毒症。如果肌酐和尿素氮同时升高,提示肾严重损害,如果尿素氮升高而肌酐不高常为肾外因素所致。肌酐降低:肾衰晚期、肌萎缩、贫血、白血病、尿崩症等。

检验原理

肌酐+H2O肌酐酶肌酸

肌酸+H2O肌酐酶肌氨酸+尿素

肌氨酸+O2+H2O甘氨酸+HCHO+H2O2

H2O2+TOOS+4AP醌亚氨染料

主要组成成分

组成浓度

试剂 1(R1)

Tris 缓冲液:100mmol/L;肌氨酸氧化酶:6KU/L;抗坏血酸氧化酶:2KU/L;TOOS:0.5mmol/L;表面活性剂:适量;

试剂 2(R2)

Tris 缓冲液:100mmol/L;肌酐酶:40KU/L;4-氨基安替比林:0.13mmol/L;过氧化物酶:1.6KU/L;

储存条件及有效期:未开封试剂避光保存于 2~8℃,有效期 12 个月;试剂开封后避光保存于 2~8℃,在无污染情况下有效期 1 个月;试剂不可反复冻融。

样本要求

1.血清、血浆。

2.稳定性:2~8℃ 保存可稳定1周,-25~-15℃ 保稳定 1 个月。

适用仪器:日立 7180/7170/7060/7600 全自动生化分析仪、雅培 16000、OLYMPUS AU640 全自动生化分析仪。

检验方法

1.  试剂配制:液体试剂开启即可使用

2. 测定条件:主波长:546nm;副波长:700nm;比色杯光径:1cm;温度:37℃分析类型终点法

3. 校准程序:用纯化水与 CREA 校准品两点定标。校准品另购,建议使用 RANDOX 或其它有溯源性的校准品。

4. 质控程序:测定肌酐 (CREA) 质控品,测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。

5. 操作步骤:样本(标准)4uL;R1 180uL 混匀,37℃ 孵育 5 分钟,读吸光度 A1。R2 60uL 混匀,37℃ 孵育 5 分钟,读吸光度 A2,计算 ΔA。

6. 计算方法

样本 △A/min

样本浓度=———————×标准浓度

标准 △A/min

参考区间

血清和血浆(男):53~123umol/L;血清和血浆(女):44~106umol/L

尿液(男):7.1~17.1mmol/24h;尿液(女):5.3~15.9mmol/24h

确定方法:通过临床试验选定不少于 100 个男性或 100 个女性正常人群血或尿标本,经全自动生化分析仪测定,所得测定值用统计学方法处理,并计算参考区间。建议各实验室建立自己的参考区间!

检验方法的局限性:当样本中抗坏血酸浓度 ≤1704μmol/L,胆红素浓度 ≤425μmol/L,血红蛋白浓度 ≤200mg/dL,甘油三酯浓度 ≤1000mg/dL,羟苯磺酸钙浓度 ≤100mg/L 时没观察到干扰。

检验结果的解释:人为的误差、标本的处理、分析仪器的偏离等均可影响测定结果;当个别样本偏离预期值太远时,需要重新测定。

产品性能指标

1.  在 37℃、546nm 波长、1cm 光径条件下,试剂空白吸光度不超过 0.300。

2. 精密度:重复性CV不超过 5%;批间相对极差R不超过 6%;

3. 准确度:相对偏差不超过10%。

4. 线性范围:

1)在20~2000μmol/L 区间内,相关系数r应不小于 0.990;

2)[20~70]μmol/L 区间内,实测浓度与估计值的绝对偏差应在 ±7μmol/L 范围内;(70~2000]μmol/L 区间内,实测浓度与估计值的相对偏差应不超过±10%。

5. 分析灵敏度:测试 100μmol/L 肌酐时,吸光度差值绝对值应不小于 0.01。

6. 稳定性:所有剂型试剂严格执行避光和2~8℃储存的条件下可在标签所示失效日前使用;试剂开瓶后可稳定30天。

注意事项

1.  避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂,若试剂与皮肤及粘膜接触,请用水冲洗,必要时请就医。

2. 废液处理:建议参照各地方法规要求。

3. 本法线性上限为2000μmol/L。如样本测定值超过上限,用0.9%氯化钠溶液稀释后再测定,结果乘以稀释倍数。

4. 本说明书适用于双试剂。

5. 其他型号仪器建议各实验室自行验证,如需详细测定参数可与我公司联系。

6. 不同批号试剂不能混用,更换试剂批号时,请重新定标!

Q:肌酸脒基水解酶应用有哪些?

肌酸脒基水解酶用于工业上测定肌酐含量,除此之外,也经常被用于临床分析诊断血清和尿液中肌酐含量和与健康机体中肌酐含量不同的肾脏疾病。肌酐是应用人体磷酸肌酸代谢的最终产物,经肾脏过滤后,再从血液中进入尿液,排出体外。

Q:肌酸脒基水解酶是什么?

肌酸脒基水解酶是酶促方法检测肌酐含量的必不可少的酶,它能够将肌酸转化成肌氨酸和尿素,进一步生成能够进行化学检测的过氧化氢。该酶主要来源于微生物,目前已被广泛应用于医疗诊断、有机合成等行业。

Q:肌酸酶应用?

肌酸酶与肌氨酸氧化酶混合可用于测定不同pH值、温度、酶比和缓冲液浓度下的肌酸水平。也可以通过使用离心分析仪来测定血浆肌酐水平。

Q:肌酸酶是什么?

肌酸酶是催化肌酸水解的同型二聚体。它由两个单体亚基和两个定义的结构域(N末端域和C末端域)组成。C末端折叠在两个结构相似的域内具有α螺旋和反平行β片。在这两个结构域之间,有一个巯基充当活性位点,并且活性与金属无关。

Q:肌酐酶法什么意思?

肌酐酶法是用肌酐酶催化肌酐后,据其水解物的测定来测定血肌酐值的方法。由于酶是在活细胞内产生的一种蛋白质,在细胞内或分泌到细胞外起同样的催化作用。酶是生物体进行新陈代谢必不可少的物质,虽然酶法成本高,但由于酶相对特异性好,目前多采用酶法测定血肌酐值。由于医院的不同、试剂的不同、测定仪器的不同,故测定血肌酐值参考值范围也不同。因此,检查血肌酐值的正常与否及其前后对照,要在同一个医院进行测定与比较。

Q:肌氨酸氧化酶应用?

肌氨酸氧化酶简称SOX,是肌酐降解代谢途径中的第三个酶,能专一性地催化底物肌氨酸生成甘氨酸。肌氨酸氧化酶在临床诊断中有广泛的应用,通过肌氨酸氧化酶偶联肌酐酶、肌酸酶测定血清中肌酐的含量,是判断肾脏功能的一个重要参考指标,在医药领域具有良好的应用前景。

Q:肌氨酸氧化酶的作用?

肌氨酸氧化酶可以氧化肌氨酸成甘氨酸和甲醛。它和肌酐酶和肌酸酶一起用于肌酐酶法检测。本品仅供科研使用。

Q:肌氨酸氧化酶的制备?

一种制备肌氨酸氧化酶的方法。这种方法的原理主要在于:将优化后的肌氨酸氧化酶编码基因插入构建好的表达载体,在大肠杆菌中诱导其高效表达,该方法具体为:肌氨酸氧化酶表达载体的构建:通过基因工程手段利用NdeI和XhoI位点将其克隆至PRSFDuet载体内,并转化大肠杆菌TOP10菌株,挑取数个转化克隆提取质粒,通过限制性内切酶酶切鉴定目的基因是否插入载体,选取插入目的基因的质粒进行DNA序列测定,结果表明肌氨酸氧化酶基因成功克隆至pRSFDuet载体内,将其命名为SAOpRSF。

Q:肌氨酸氧化酶的表达?

1.肌氨酸氧化酶以BL21(DE3)为宿主菌,将SAOpRSF进行转化,挑取单菌落于3mlLB培养基培养过夜;2.以1∶500比例将菌液转接至400mlLB培养基,恒温在37℃,230rpm培养至OD600=0.4‑0.6;3.加IPTG诱导,IPTG诱导终浓度为0.5mM,保持25℃条件下表达8小时后收菌。BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。普通大肠杆菌没有t7RNA聚合酶,所以不能表达那些载体上的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于BL21的染色体上,就叫BL21(DE3)。

Q:肌氨酸氧化酶的纯化?

1.取400ml培养液3000rpm离心分离10分钟后收集菌体,肌氨酸氧化酶菌体重悬于10ml蛋白提取缓冲液中(50mMNa‑PO4,pH8.0,500mMNaCl,10mMImidazle),15MPa高压破菌,12,000rpm,4℃离心10min,上清液与Ni‑NTA冰上孵育1小时;2.过Ni‑NTA亲和层析柱,用蛋白提取buffer洗涤,最后用250mMImidazle洗脱,收集洗脱液。3.蛋白洗脱液过G50柱去除Imidazle,这样可以得到95%以上纯度的SAO。4.肌氨酸氧化酶活性测定:制备肌氨酸氧化酶的纯品用奥林巴斯AU5400生化仪测定活性,酶活可达30000U/L,且‑20℃甘油冻存6个月,酶活基本保持不变。

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