探针法荧光定量 PCR 预混液（通用校正染料） 是基于独特的双组份热启动 Taq 聚合酶开发的实时定量 PCR 用 2× 预混液。本产品已包含除引物和样品 DNA 以外的所有荧光定量 PCR 组分，可减少操作步骤，缩短加样时间， 降低了污染几率，适用于以 cDNA 或 DNA 为样品的 TaqMan 探针法检测。
本产品含有独特校正染料，与一系列 qPCR 设备兼容，包括需要 ROX 校正的仪器，实验操作过程中不需要额外添加染料来校正仪器。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 探针法荧光定量 PCR预混液（通用校正染料） | HSM030062 | 5×1 mL |
使用说明
1. 使用注意
① 因 Mix 中预混有染料，其保存或反应体系配制过程应避免强光照射；
②使用前上下颠倒轻轻混匀 Mix，请勿涡旋振荡混匀，避免产生过多气泡；
③Mix 中含有 Universal 校正染料，适用于所有机型，无需额外添加染料。
2. 建议的 qPCR 反应体系
| 试剂 | 使用量 | 终浓度 |
| 探针法荧光定量PCR 预混液（通用校正染料） | 10μL | 1× |
| 正向引物 (10 μM)a | 0.4μL | 0.2 μM |
| 反向引物 (10 μM)a | 0.4μL | 0.2 μM |
| TaqMan 探针 (5 μM)b | 1μL | 0.25 μM |
| DNA 模板c | XμL | 10~200ng/20μL |
| Nuclease-Free Water | To 20μL |
a．通常推荐的引物终浓度为 0.2 μM，反应效果不佳时可在 0.1~1 μM 范围内进行调整；
b．推荐模板加样量为 1~2 μL，如模板类型为未稀释 cDNA 原液，模板添加量不应超过总反应体系的 10%。不同种类 DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定最佳的 DNA 模板添加量。
c. 模板添加量不应超过总反应体系的 10%， 推荐加样量为 1~2 μL。不同种类 DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定最佳的 DNA 模板添加量。
2. qPCR 参数设置（可根据机型适当调整）
两步法
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5min |
| 变性 | 95℃ | 10s |
| 退火 & 延伸 | 60℃ | 30s |
注意事项
① 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡， 并经短暂离心后使用。
② 避免反复冻融 Mix，开启后尽量在 3 个月内使用完毕。
常见问题及解决办法
1.扩增曲线混乱或缺失
①仪器设置不正确根据仪器说明书调整设置；
②引物或模板浓度不当调整引物和模板浓度；
③PCR 反应条件不当降低退火温度、延长延伸时间等。对于 GC 含量高的目标片段，可适当延长变性时间；
④引物或模板存在高级结构重新设计引物；
⑤样品纯度不好进一步纯化样品；
2.定量值重复性差
①仪器设置不正确根据仪器说明书调整设置；
②样品纯度不好进一步纯化样品；
③引物浓度不当尝试适当提高引物浓度；
④PCR 反应条件不当尝试降低退火温度、延长延伸时间等；
⑤引物设计不当重新设计引物，减少目标片段的高级结构；
⑥实验操作误差严格按照操作规程，保证反应体系中各组分体积精确
3.空白对照出现信号
①出现污染首先更换空白对照的水，如果还发生同样情况， 继续更换引物、吸头、管或启用新的 MixPCR。
