产品描述
肽 N-糖苷酶 F 是从糖蛋白中去除几乎所有 N-糖链的最有效的方法。肽 N-糖苷酶 F 是一种酰胺酶 ，切割糖蛋白上的 N-连接糖链。切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖；切割位点为：最内侧的 N-乙酰葡糖胺和天冬酰胺之间的糖苷键。尽可能短的时间内获得准确的 N-糖链分布对有效的过程控制至关重要。通常，使用肽 N-糖苷酶 F 水解释放抗体 N-糖链需要几个小时的孵育时间，然后进行聚糖衍生和液相色谱或质谱分析。若去糖基化不完全，获得的糖链分布不能代表治疗性抗体的正确组成。肽 N-糖苷酶 F(快速版)是一种改进的试剂，可以在几分钟内完成抗体和融合抗体的快速去糖基化。所有的 N-糖链都能快速无偏好地释放出来 ，并准备好进行下游色谱或质谱分析 ，进而快速的对糖基化抗体确定糖型。
技术指标
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外观 |
无色液体 |
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糖苷外切酶 |
无 |
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糖苷内切酶 F1 |
无 |
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糖苷内切酶 F2 |
无 |
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糖苷内切酶 F3 |
无 |
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糖苷内切酶 H |
无 |
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蛋白酶 |
无 |
酶学性质
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来源 |
微生物 |
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分类 |
EC 3.5.1.52 |
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分子量 |
35 kDa (SDS-PAGE) |
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等电点 |
8.14 |
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最适 pH |
7.0-8.0 |
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最适温度 |
65℃ |
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底物选择性 |
水解蛋白质的 Asn相连的N-糖链，使 N-聚糖保持完整。 |
图 1 |
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抗体水解位点 |
完整地水解糖基化抗体的糖链 图 2 |
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激活剂 |
DTT |
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抑制剂 |
SDS |
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储存温度 |
-25～ -15 °C |
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失活条件 |
含 1μL 肽 N-糖苷酶 F(快速版)的20 μL 反应混合物在 75 ° C 孵育10min 即可失活。 |
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图 1. 肽 N-糖苷酶 F 的底物特异性
图 2. lgG 的结构和可能的糖基化位点 ，红色箭头表示的是肽 N-糖苷酶 F 的识别水解位点
用途
用于糖基化抗体的快速去糖基化，分离纯化的糖链可用于后续的质谱鉴定抗体的糖型。
试剂组成
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PNGase F-Fast |
50 µl |
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5 × PNGase F-Fast buffer |
1000 µl |
