宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(磁珠法)适用于生物制品样本中残留 DNA 检测的前处理，可稳定高效地获得样本中的微量宿主细胞DNA。本试剂盒适用于多种基质缓冲溶液，可最大限度的分离纯化样本中的微量 DNA，可与各种宿主细胞(CHO、E.coli、Vero、酵母、 NS0、 Human、 MDCK、 Sf9&AcNPV、 Hi5&AcNPV、质粒、SV40LTA&EIA)的宿主残留 DNAqPCR 检测试剂盒配合使用。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| 宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(预分装孔板) | HBP003611 | 64T |
产品组分
| 试剂盒A组成 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| 预分装深孔板 | 16T*4 | 10~30℃ |
| 磁棒套 | 8个 | |
| 裂解液REL | 8mL |
| 试剂盒B组成 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| 蛋白酶K | 0.7mL | -25~-15℃ |
| 糖原 | 0.7mL | |
| 酵母tRNA | 0.45mL |
运输及保存方法
试剂盒 A：室温(10~30℃)保存，有效期 12 个月。预分装深孔板开封后须一次性用完。试剂盒 B：-25~-15℃保存，有效期 12 个月。
所需耗材与设备
Pure 32 型全自动核酸提取纯化仪、恒温水浴锅、干式恒温仪、离心机、涡旋振荡器、超净台、磁力架、 Nuclease-free 离心管、 Nuclease-free 枪头。
样本准备
1. 生物制品纯化过程中的上游中间样本(可能 DNA 含量较高）
1.1 先稀释后纯化：使用 1×PBS(pH 7.4，无镁离子和钙离子)进行适当比例稀释后再进行样本纯化处理。
1.2 先纯化后稀释：用稀释液对样本纯化后再进行稀释处理。
1.3 为了保证检测的准确性，使样本的检测值在标准曲线线性范围之内，DNA 含量高的样本需要进行适当比例稀释处理(建议将 DNA含量高样本稀释 100 倍或 1000 倍)。如果样本经过了稀释，则用稀释液作为阴性对照。
2. 干粉样本(选其一)
2.1 样本溶解及纯化：用稀释液将干粉样本进行溶解，再进行样本纯化处理。
2.2 样本溶解稀释及纯化：用适当的试剂将干粉样本溶解，配成高浓度溶液，用稀释液稀释后，再进行样本纯化处理。
2.3 建议将干粉样本稀释成 10 mg/mL 或100 mg/mL。
3.pH 过高或过低样本
3.1 一般情况下生物制品纯化过程的中间样本的 pH 值均为中性，若样本的 pH 过酸或过碱，会影响样本纯化处理效果。
3.2 调节 pH：样本处理前先测试一下样本pH 值，可以用 1M HCl/NaOH 调节 pH 至中性（pH6.0~8.0），再进行纯化操作。
4. 对照样本处理
4.1 样本平行处理：为了确保结果的准确性，建议每个样本进行三次 DNA 提取处理和检测。
4.2 阴性对照(NTC）：每次实验中都需设置一个空白样本作为 NTC，NTC 与其他待测样本一起进行处理，以检验在样本处理过程中是否存在交叉污染或环境污染。
4.3 加标回收(ERC）：用 ERC 来评估 DNA提取的效率、回收率和准确度，并可用 ERC来评估验证分析方法和系统性能。对具体样本的DNA加标量设定在其无加标测试值的2~10倍为宜。
实验流程
1. 试剂准备：实验前小幅度振荡几次预分装深孔板，避免液体残留在封口膜上。检查溶液是否有沉淀，磁珠是否能重悬。
2. 取 100μL 待测样本于 1.5mL 或 2.0mL 离心管中。
3. 加入 100μL 裂解液 REL、10μL 蛋白酶 K，高速涡旋混匀 10 秒。瞬时离心后于 60℃孵育40 分钟。（若蛋白浓度较高，如≥100mg/mL，可酌情调整为投入 20μL 蛋白酶 K，孵育 60分钟，且孵育期间每隔 15 分钟涡旋混匀）
4. 孵育完成后，瞬时离心收集管盖液滴至管中。
5. Pure32 型全自动核酸提取纯化仪：将预分装深孔板平放于桌面，轻轻拍打几下让孔壁上的液滴滴回孔中，小心去除封口膜。
6. 转移步骤 4 离心后的全部溶液到预分装深孔板第 2/8 列的孔中，加入 9μL 糖原、6μL酵母 tRNA，每块预分装深孔板可以处理 16个样本。
7. 将深孔板放入核酸提取纯化仪的底座卡位上，在磁棒套卡槽中插入 8 联磁棒套，选择程序，点击运行程序进行提取。
注意：即使只提取 1 个样本，也需要装上 2个 8 联磁棒套，以避免磁棒直接接触试剂。
注意：保持深孔板以第 1 列在左，第 12 列在右的方向放入底座卡位，如放置错误，无法获得 DNA。
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 1 |
| 名称 | 取磁珠 | 结合 | 漂洗 | 漂洗 | 漂洗 | 洗脱 | 弃磁珠 |
| 板位 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 1 |
| 容积 | 400 | 900 | 800 | 800 | 800 | 100 | 400 |
| 温控 | 关 | 开 | 关 | 关 | 关 | 开 | 关 |
| 温度 | 25 | 70 | |||||
| 振动速度（HZ） | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 |
| 振动幅度（%） | 85 | 85 | 85 | 85 | 85 | 85 | 85 |
| 振动时间（s) | 10 | 600 | 60 | 60 | 60 | 300 | 10 |
| 等待模式 | 上方 | 上方 | 上方 | 上方 | 上方 | 上方 | 上方 |
| 等待时间（s) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 60 | 0 |
| 吸磁模式 | 分步 | 分步 | 分步 | 分步 | 分步 | 分步 | |
| 吸磁速度 | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 | 0 |
| 吸磁次数 | 3 | 5 | 3 | 3 | 3 | 5 | 0 |
| 吸磁时间（s) | 30 | 120 | 30 | 30 | 30 | 120 | 0 |
8. 提取产物在第 6/12 列洗脱液的孔中，如果不立即使用，请转移至 1.5 mL 无菌无核酸酶的离心管中，存储于-15~-25℃，长期保存请放置于-70℃或更低的温度。
注意事项
1. 使用前请仔细阅读本说明书。
2. 本试剂盒中的多种缓冲液含有刺激性的胍盐，务必戴上手套，并按照安全标准预防措施来处理。不要让缓冲液接触到皮肤、眼睛以及黏膜，如果确实发生，请立即用大量清水清洗并就医。
3. 如因气温较低，溶液出现沉淀，需要 30℃水浴至沉淀完全溶解后方可使用。
4. 如因气温较低，裂解液 REL 出现沉淀，可60℃水浴至沉淀完全溶解后使用。
5. 如因气温较低，用力振荡后磁珠无法重悬，请勿使用。
6. 本试剂盒中的多种缓冲液含胍盐，请勿用氧化性消毒剂如次氯酸钠进行处理，否则会释放有毒气体，须按医疗废物进行处理。
7. 如果提取酵母 DNA，则不需要加酵母 tRNA。
