PNGaseF 是从糖蛋白中去除几乎所有 N-糖链的最有效的方法。PNGase F 是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的 N-连接糖链。切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖；切割位点为：最内侧的 N-乙酰葡糖胺和天冬酰胺之间的糖苷键。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| 糖苷酶F | HBP003005 |
技术指标
| 外观 | 无色液体 |
| 蛋白纯度 | ≥95%（SDS-PAGE） |
| 比活性 | ≥500,000U/mL |
| 糖苷外切酶 | 无 |
| 糖苷内切酶F1 | 无 |
| 糖苷内切酶F2 | 无 |
| 糖苷内切酶F3 | 无 |
| 糖苷内切酶H | 无 |
| 蛋白酶 | 无 |
酶学性质
| 来源 | 微生物 |
| 分类 | EC3.5.1.52 |
| 分子量 | 35kDa(SDS-PAGE) |
| 等电点 | 8.14 |
| 最适pH | 7.0-8.0 |
| 最适温度 | 65℃ |
| 底物选择性 | 水解蛋白质的 Asn相连的N-糖链，使 N-聚糖保持完整。 |
| 糖蛋白水解位点 | 除含α1-3岩藻糖苷键外，能切割所有N-糖链。 |
| 激活剂 | DTT |
| 抑制剂 | SDS |
| 储存温度 | -25～-15 °C |
| 失活条件 | 含1μLPNGaseF的20 μL反应混合物在 75 °C孵育10min即可失活。 |
图1. PNGaseF的底物特异性
图2. PNGaseF的识别位点。当内部的 GlcNAc残基与α1-3 岩藻糖残基连接时，PNGaseF不能从糖蛋白切割N-糖链。这种修饰常见于植物和一些昆虫糖蛋白。
用途
用于从糖蛋白中去除 N-糖链。
酶活定义
单位酶活定义为在下述条件下，10 μL 的反应体系中，37 °C 反应 1 小时从 10 μg 变性RNase B 中除去超过 95%的碳水化合物所需要的酶量。
试剂组成
| PNGaseF | 50µL |
| 10 × Glycoprotein Denaturing Buffer | 1000µL |
| 10×GlycoBuffer2 | 1000µL |
| 10%NP-40 | 1000µL |
操作步骤
1. 用去离子水溶解 1-20 µg 的糖蛋白，加入 1 µL 的 10 × Glycoprotein DenaturingBuffer，用去离子水定容到10µL；
2. 100 °C 孵育 10 min；
3. 加入 2 µL 的 10×GlycoBuffer 2，2 µL的 10% NP-40，轻轻吹打混匀；
4. 加入 1-2 µL 的 PNGase F，加去离子水到 20 µL，轻轻吹打混匀；
5. 37 °C 孵育 60 min；
6. 用于 SDS-PAGE 分析或 HPLC 分析。
