PNGase F （肽 N- 糖苷酶 F） 来源于Elizabethkingia miricola，是一种高效的酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGaseF 的切割位点为糖蛋白内侧 N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品通过大肠杆菌重组表达，带有 His 标签，不含甘油，常应用于抗体及其相关蛋白去糖基化。本品既可以在 37℃下按照常规程序进行反应，也可以在 50℃下快速完成去糖基化。使用过程中避免反复冻融。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| 肽N-糖苷酶 F（His标签，无甘油） | HSC090021 | 15000U |
产品组分
| 组分 | HSC090021-01 | HSC090021-02 |
|---|---|---|
| PNGaseF（GlycerolFree） (500U/μL) | HSC090021-01A 30 μL | HSC090021-02A 150 μL |
| 10× Denaturing Buffer | HSC090021-01B 150 μL | HSC090021-02B 750 μL |
| 10× PNGaseF Buffer | HSC090021-01C 200 μL | HSC090021-02C 1mL |
| 10%NP-40 | HSC090021-01D 200 μL | HSC090021-02D 1mL |
酶活定义
1 个酶活力单位 (U) 指在 10 μL 反应体系中，37℃下反应 1 h 从 10 μg 变性 RNaseB中除去超过 95%碳水化合物所需要的酶量。
质量控制
• 蛋白纯度检测：使用 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
• 糖苷酶与蛋白酶活性检测：无可检出的内切糖苷酶 F1、F2 或 F3 活性；无可检出的蛋白酶活性。
• 失活条件：75℃温育 10 min。
运输及保存方法
冰袋运输。2 ～ 8℃保存。注：避免反复冻融。
使用说明
1.变性条件下去糖基化
(1)常规步骤
① 将 1~20 μg 糖蛋白，1μL 10×Denaturing Buffer 和 ddH2O（如有必要）混合至总体积10 μL；注：10×Denaturing Buffer 在低温储存时可能出现白色沉淀，使用前可先在37℃下温育使其溶解。
② 100℃反应 10 min 使糖蛋白变性后，冰上冷却，离心 10s；
③ 加入 2 μL 10×PNGase F Buffer，2 μL 10% NP-40，补充 ddH2O 使总反应体积为20 μL；
④ 加入 1~2 μL PNGase F，轻轻混匀，37℃孵育 1~3 h。
(2) 快速步骤
①将 1~20 μg 糖蛋白，1 μL10×Denaturing Buffer 和 ddH2O（如有必要）混合至总体积10μL；注：10×Denaturing Buffer 在低温储存时可能出现白色沉淀，使用前可先在37℃下温育使其溶解。
② 80℃反应 2 min 使糖蛋白变性后，冰上冷却，离心 10s；
③ 加入 2 μL 10×PNGase F Buffer，2 μL 10% NP-40，补充 ddH2O 使总反应体积为20μL；
④ 加入 1 μLPNGase F，轻轻混匀，50℃孵育 10min。
2. 非变性条件下去糖基化
(1)常规步骤
① 将 1~20 μg 糖蛋白，2μL 10×PNGase F Buffer 和 ddH2O（如有必要）混合至总体积20μL；
② 加入 2~5 μLPNGaseF, 轻轻混匀；
③ 37℃ 孵育 4~24 h。
(2)快速步骤
① 将 1~20 μg 糖蛋白，2 μL10× PNGase F Buffer 和 ddH2O（如有必要）混合至总体积20μL；
② 加入 1μL PNGase F, 轻轻混匀；
③50℃孵育 10 min。
PNGase F 的去除
本产品带有 His 标签，反应后可选择与目标糖蛋白不同的标签，通过亲和层析将 PNGase F去除。
