Poly(A) Polymerase 是一种来源于大肠杆菌的聚合酶，也称 E. coli PAP、PAP 酶、Poly(A)加尾酶或 Poly A 加尾酶，经大肠杆菌重组表达后纯化获得。Poly(A) Polymerase 不依赖于模板，催化 ATP 转化为 AMP 并添加至单链 RNA 的 3′端，形成多聚腺苷尾。Poly(A) Polymerase 无法以 DNA 为底物，且不推荐使用双链 RNA 或过短的寡核苷酸（＜20nt）为底物。Poly(A) Polymerase 催化的 Poly(A)加尾反应只能使用 ATP，而不能使用 ADP 或 dATP。使用 CTP 和 UTP 时，其掺入量不足使用 ATP 的 5%；使用 GTP 时，完全不能添加到 RNA 的 3′末端。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
| Poly(A) RNA聚合酶 | HSM060211-01 | 20 μL |
| HSM060211-02 | 100 μL |
产品组分
| 组分 | HSM060211-01 | HSM060211-02 |
| Poly(A) RNA Polymerase (5U/μL) | 20 μL | 100 μL |
| 10×PAP Buffer | 1mL | 1mL |
| ATP(10mM) | 200 μL | 200 μL |
活性定义
1 活性单位(U)是指在 20µL 反应体系中，37℃条件下，10 min 催化 1nmol 的 AMP 掺入 RNA 所需要的酶量。
产品应用
1. 在 RNA 末端添加 Poly(A)尾，用于后续克隆或纯化。
2. 提升 mRNA 在真核细胞中的翻译效率。
3. RNA 的 3′末端标记。
4. cDNA 合成，为 miRNA 添加 Poly(A)尾后逆转录获得 cDNA。
质量控制
蛋白纯度
经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性
37℃下，在 20μL 反应体系中将 5U Poly(A) Polymerase 与 200ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性
37℃下，在 20μL 反应体系中将 5U Poly(A) Polymerase 与 15ng 双链 DNA 片段共同温育 16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
RNase 活性
37℃下，在 10μL 反应体系中将 5U Poly(A) Polymerase 与 500ng RNA 共同温育 1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，超过 90%的 RNA 保持完整。
宿主 DNA 残留
采用中国药典 2020 版四部通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法定量 PCR 法，本品中大肠杆菌宿主细胞 DNA 残留量<10 拷贝/5U。
使用方法
1. 于冰上配制如下反应体系：
| 试剂 | 使用量 |
| RNAa | 1~10 μg |
| 10×PAP Buffer | 2 μL |
| Poly(A) RNA Polymerase(5U/μL) | 1 μL |
| ATP(10mM) | 2 μL |
| RNase Inhibitor(可选) | 0.5~1 μL |
| Nuclease-Free Water | Up to 20 μL |
a：为避免杂质影响加尾酶活性，应当使用纯化后的 RNA；若 RNA 3′端存在高级结构，建议对 RNA 进行预变性(65℃加热 5min，冰上放置 5min)后再进行加尾，避免影响加尾效果。
2. 37℃孵育 30~60min。加尾长度受酶量、ATP 浓度、反应时间等多个因素影响，可根据实际反应情况进行体系调整。
3. 按照以上反应体系，加 Poly(A)尾长度可以超过 100 个碱基。
4. 加入 EDTA 至终浓度为 10mM 或 65℃孵育 20min 终止反应。
注意事项
1．加尾长度受酶量、ATP 浓度和反应时间等因素影响，一般本酶在 37℃反应 30min 可加约 30 个 A 碱基，60min 可加约 100 个 A 碱基。
2．该酶将 AMP 添加到 RNA 的 3′末端具有较高的选择性，并不会在所有 RNA 分子中添加相同长度的 Poly(A)。
3．加尾结束后，在转染细胞或显微注射前，必须对 RNA 进行纯化。
4．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。
