T4 Polynucleotide Kinase（简称 T4 PNK），中文名称 T4 多聚核苷酸激酶，是一种多聚核苷酸 5′-羟基激酶，能够催化 ATP 上的 γ-磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或者 RNA）或 3′-单磷酸核苷上的 5′-羟基末端，且该反应过程可逆。此外，T4 PNK 还具有 3′-磷酸酶活性，可以将 3′-磷酸基团从寡核苷酸的 3′磷酸末端、脱氧 3′-单磷酸核苷和脱氧 3′-二磷酸核苷上水解掉。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
| T4多聚核苷酸激酶（T4 PNK） | HSM060151 | 500U |
产品组分
| 组分 | 规格 |
| T4多聚核苷酸激酶（T4 PNK）(10U/μL) | 50μL |
| 10×T4 PNK Buffer | 1mL |
活性定义
1 活性单位(U)定义为在 1×T4 PNK Buffer 中，37℃、30 min 内使 1nmol 的[γ-32P]ATP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
质量控制
蛋白纯度：经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性：37℃下，在 20μL 反应体系中将 10U T4 多聚核苷酸激酶与 200ng 的超螺旋质粒 DNA 共同温育 4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20% DNA 质粒转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性：37℃下，在 20μL 反应体系中将 10U T4 多聚核苷酸激酶与 15ng 双链 DNA 片段共同温育 16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
RNase 活性：37℃下，在 10μL 反应体系中将 10U T4 多聚核苷酸激酶与 500ng RNA 共同温育 1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，超过 90%的 RNA 保持完整。
宿主 DNA 残留：采用中国药典 2020 版四部通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法定量 PCR 法，本品中大肠杆菌宿主细胞 DNA 残留量低于 1 拷贝/10U。
产品应用
1. 对 DNA 或 RNA 5′末端进行磷酸化，以便进行连接反应。
2. DNA 或 RNA 的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序。
3. 除去 3′磷酸基团。
使用方法
1. DNA 5′末端磷酸化：
| 试剂 | 使用量 |
| 底物a | 1~300pmol(5′末端) |
| 10×T4 PNK Buffer | 5 μL |
| T4多聚核苷酸激酶 | 1 μL |
| ATP(10mM) | 5 μL |
| ddH2O | Up to 50 μL |
a：10×T4 PNK Buffer 不含 ATP，需自行准备。
1) 将上述体系充分混匀后，37℃温育 30min；
2) 反应完成后，75℃温育 10min 使 T4 多聚核苷酸激酶失活。
2. DNA 5′末端标记：
| 试剂 | 使用量 |
| 底物b | 1~50pmol(5′末端) |
| 10×T4 PNK Buffer | 5 μL |
| T4多聚核苷酸激酶 | 2 μL |
| [γ-32P]ATP(10mM) | 0.25 μL |
| ddH2O | Up to 50 μL |
1) 将上述体系充分混匀后，37℃温育 30min；
2) 反应完成后，75℃温育 10min 使 T4 多聚核苷酸激酶失活。
注意事项
1. 金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于 50mM 的 KCl 和 NaCl 均可显著抑制 T4 多聚核苷酸激酶的活性。
2. 聚乙二醇(PEG)和亚精胺可改善磷酸化反应的速率和效率。
3. 提高 ATP 的浓度可让缺口磷酸化。切刻位点不能有效地磷酸化。CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可以替代 ATP 作为磷酸供体。
4. T4 多聚核苷酸激酶使用时宜置于冰上，使用完毕后立即放置于-25~-15℃保存。
