琼脂糖作为凝胶电泳常用支持物,其纯度会直接影响 DNA 的分辨能力及电泳结果的清晰度。
Agarose 为高纯度的琼脂糖,通常配置成浓度为 0.5~2% 的琼脂糖凝胶,用于分离、鉴定核酸,如 DNA 鉴定、DNA 限制性内切核酸酶图谱制作等。加入核酸荧光染料,使用凝胶成像扫描仪,即可观察电泳结束后的核酸条带。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 琼脂糖 | HSM040111-01 | 100g |
| HSM040111-02 | 500g |
质量控制
凝胶强度(1% 凝胶):> 1200 g/cm²;
电渗(EEO):<0.15;
硫化物:≤0.15%;
凝胶温度(1.5% 凝胶):35~37℃;
熔胶温度(1.5% 凝胶):87~89℃;
水分:≤10%;
核酸酶不得检出。
实验方法
1. 依据目的核酸片段大小及电泳缓冲液类型,确定所需琼脂糖浓度。
| 琼脂糖浓度 | 理想线形 DNA 分辨范围(bp) | |
| 1×TAE | 1×TBE | |
| 0.6% | 1200~15000 | 1200~12000 |
| 0.8% | 1000~10000 | 1000~12000 |
| 1.0% | 200~10000 | 100~10000 |
| 1.2% | 100~8000 | 100~5000 |
| 1.5% | 100~5000 | 50~3000 |
| 2.0% | 50~3000 | 50~3000 |
| 2.5% | 50~3000 | 50~2000 |
2. 琼脂糖凝胶制备(以水平电泳琼脂糖凝胶制备为例):
(1)根据制胶量及凝胶浓度,量取一定量的电泳缓冲液(TAE 或 TBE),倒入三角锥形瓶中。
注:制胶缓冲液和电泳缓冲液需一致。
(2)准确称量琼脂糖,小心加入上述三角锥形瓶中。在锥形瓶的瓶口盖上牛皮纸,置于微波炉中加热熔解。加热至溶液沸腾后,请戴上防热手套,小心晃动锥形瓶,如此重复数次,直至琼脂糖完全溶解。
注:琼脂糖熔解过程应采用多次短暂沸腾的方法,避免溶液过热暴沸。同时应保证琼脂糖充分完全熔解,以免造成电泳图像模糊不清。
(3)向充分熔解的琼脂糖里加入核酸染料。
(4)将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在 3~5 mm 之间。
(5)室温下待胶凝固(大约 30 min~1 h),置于电泳槽中进行电泳。
注意事项
1. 熔胶可能会引起暴沸,需注意防止烫伤;
2. 若使用具有致癌性的荧光染料进行凝胶核酸染色(如溴化乙锭等),请佩戴手套;
3. 配置好的凝胶如不立即使用,请将凝胶泡于电泳缓冲液(TAE 或者 TBE 中)备用,避免凝胶干裂;
4. 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
