Bsa I 限制性内切酶是由大肠杆菌重组表达的嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）基因编码的蛋白突变体，是一种 IIS 类限制性内切酶，可识别特异性位点，其与天然酶具有相同的特异性，并降低了星号活性。其识别序列和切割位点如下：
5'······GGTCTC(N)···········3'
3'······CCAGAG(NNNNN)······5'
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| Bsa I 限制性内切酶 | HBP001306 | 1 KU |
| HBP001307 | 5 KU | |
| HBP001308 | 200 KU | |
| HBP001309 | 2000 KU | |
| HBP001310 | 20 KU |
产品组分
| 组分 | 1 KU | 5 KU | 20 KU |
|---|---|---|---|
| Bsa I（20 U/μL） | 50 μL | 250 μL | 1mL |
| 10× Bsa I Buffer | 1.25 mL | 1.25 mL | 4×1.25 mL |
| 组分 | 200 KU | 2000 KU |
|---|---|---|
| Bsa I（20 U/μL） | 10 mL | 100 mL |
| 10× Bsa I Buffer | 5×10 mL | 5×100 mL |
随货附赠 10× Bsa I Buffer 货号
| 货号 | 规格 |
|---|---|
| HBP200026 | 1.25 mL |
| HBP200028 | 10 mL |
| HBP200029 | 100 mL |
产品储存
-25℃~-15℃储存，有效期 1 年（避免反复冻融）。
储存缓冲液
10 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，1 mM DTT 0.1 mM EDTA，200 µg/ml Recombinant Albumin，50% Glycerol. (pH 7.4 @ 25℃).
活性定义
在 37℃条件下，50 μL 反应体系中，1 小时内完全切割 1 μg 内部对照品 DNA 所需要的酶量定义为 1 个活性单位。
质量控制
蛋白纯度（SDS-PAGE）：通过 SDS-PAGE 分析，Bsa I 纯度≥95%。
RNase 活性：20 U 的本品和 1.6 μg MS2 RNA 在 37℃下反应 16 小时，RNA 的电泳谱带不发生变化。
非特异性 DNase 活性：20 U 的本品和 1 μg PhiX174 DNA 在 37℃下反应 16 小时，无多余的 DNA 电泳谱带产生。
酶切-连接-再酶切检测：使用 20 U 本品消化 1 μg λDNA/HindIII，在 16℃下使用适量 T4 DNA 连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
大肠杆菌 DNA 残留检测：2 U 本品中残留的核酸经 E.coli 16s rDNA 特异性的 TaqMan qPCR 检测，E.coli 基因组残留≤1 拷贝。
细菌内毒素（Endotoxin）：LAL-Test，中国药典 2020 版第四部凝胶限度试验法通则（1143），细菌内毒素含量≤10 EU/mg。
反应体系和条件
| 组分 | 使用量 |
|---|---|
| Bsa I（20 U/μL） | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10× Bsa I Buffer | 5 μL |
| ddH2O | Up to 50 μL |
反应条件：37℃，15-30 min。
热失活：80℃，20 min。
本说明书推荐体系可以提供较好的酶切效果，仅供参考，具体请以实验结果为准。
产品应用
限制性内切酶消化、快速克隆。
产品特点
1. 限制性内切酶的酶活力高，迅速完成酶切反应；
2. 低非特异性内切酶活性，保证“手术刀”般的精准切割；
3. 体系中无动物源物料 BSA。
甲基化修饰影响
dam 甲基化：不影响；
dcm 甲基化：被重叠的甲基化修饰阻碍；
CpG 甲基化：被重叠的甲基化修饰阻断。
注意事项
1. 限制性内切酶添加体积不超过反应体积的 1/10；
2. 甘油浓度＞5% 条件下可能出现星号活性；
3. 酶量：DNA 低于推荐比例可能出现切刻活性。
