BsmBI 属于 Type IIs 型限制酶，可识别非回文序列，并在识别序列之外进行切割，常用于 Golden Gate 组装。经过优化的反应 Buffer 使 BsmBI 最大限度发挥功能，同时反应缓冲液包含重组白蛋白，其可增强多种酶的稳定性。
BsmBI 可识别特异性位点，其识别序列和切割位点如下：
同裂酶：Esp3I
注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| BsmBI | HSM050821-01 | 200 U |
| HSM050821-02 | 1000 U |
产品组分
| 组分 | 规格 | |
|---|---|---|
| HSM050821-01A | HSM050821-02A | |
| BsmBI (10 U/μL) | 20 μL | 100 μL |
| 10× Cut Buffer C | HSM051031 1 mL | HSM051031 1 mL |
运输及保存方法
-25~-15℃运输与保存。
建议反应条件
1× Cut Buffer C；
55℃温育；
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。
本品在 37℃进行酶切反应时，有 50%的活性。
失活条件
80℃温育 20 min。
酶活定义
1 活性单位（U）是指在 50 μL 反应体系中，55℃ 1 h 内完全酶切 1 μg λDNA 所需的酶量。
质量控制
超长时间温育检测：最适反应温度下，将 10 U BsmBI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用 10 U BsmBI 消化底物，回收酶切产物。在 22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
DNase 残留检测：将 10 U BsmBI 与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。
使用方法
1. DNA 酶切流程
(1)在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 组分 | DNA |
|---|---|
| ddH2O | up to 50 μL |
| 10× Cut Buffer C | 5 μL |
| 底物 DNAa | 1 μg |
| BsmBI (10 U/μL) | 1 μL |
| Total | 50 μL |
(2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
(3)55℃温育 15 min~1 h，一般推荐 5 U~10 U 酶/pg 质粒 DNA、10 U~20 U 酶/μg 基因组 DNA，温浴 1 h；如需过夜酶切反应，请将酶量调整至 1 U；
(4)热失活（可选）：80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
aDNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响 BsmBI 酶活性。
2. 小体积推荐加样体系
| 组分 | 加入量 | |
|---|---|---|
| 10× Cut Buffer C | 1 μL | 2.5 μL |
| 底物 DNA | 0.1 μg | 0.5 μg |
| BsmBI (10 U/μL) | 1 U | 5 U |
| ddH2O | up to 10 μL | up to 25 μL |
| Total | 10 μLb | 25 μL |
b. 为避免蒸发，10 μL 反应体系的孵育时间不应超过 1 h。
不同 DNA 中的酶切位点数量
| DNA | 酶切位点数量 |
|---|---|
| λDNA | 14 |
| ΦX174 | 0 |
| pBR322 | 1 |
| pUC57 | 2 |
| pUC18/19 | 2 |
| SV40 | 0 |
| M13mp18/19 | 1 |
| Adeno2 | 21 |
甲基化修饰影响
Dam 甲基化：无影响
Dcm 甲基化：无影响
CpG 甲基化：剪切受阻
EcoKI 甲基化：无影响
EcoBI 甲基化：剪切受影响
注意事项
• 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；
• 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA 或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。
