Cfr42I(SacII) - 催化生命智造未来-瀚海新酶

Cfr42I(SacII)是经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutFlex 或 CutFlex Color Buffer 中都具有优良的活性，能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外，瀚海去磷酸化、连接试剂在 CutFlex Buffer中均具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。 CutFlex Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutFlex Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与 10 bp 双链 DNA 片段在 1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

同裂酶：SacII, KspI, Sfr303I, SgrBI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

图标注释

快速内切酶，可在 5~15 min 内完成反应

最适反应温度为 37℃

对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻

失活条件为 80℃温育 20 min

3 h 温育未表现星号活性，更长时间酶切可能出现星号活性

产品信息

产品名称	货号	包装规格
Cfr42I(SacII)	HSM052091	60rxns

产品组分

组分	规格
Cfr42I(SacII)（1 rxn/μL）	60 μL
10×CutFlex Buffer	1 mL
10×CutFlex Color Buffer	1 mL

运输及保存方法

-25~-15℃运输与保存。

建议反应条件

1. 1×CutFlex Buffer； 2. 37℃温育； 3. 参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育 20 min。

质量控制

功能活性检测：37℃下，在 20 μL 通用 CutFlex 反应体系中， 1 μL Cfr42I 能够在 15 min 内完全消化 1 μg p615。

超长时间温育检测：37℃下，在 20 μL 通用 CutFlex 反应体系中，将 1 μL Cfr42I 与 1 μg p615 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测：37℃下，使用 10 倍酶量的 Cfr42I 消化 DNA 底物，回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast)可以将超过 95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开约 95%以上的连接产物。

使用方法

1. DNA 快速酶切流程

1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

组分	质粒 DNA	PCR 产物	基因组 DNA
ddH₂O	15 μL	16 μL	30 μL
10× CutFlex Buffer 或 10× CutFlex Color Buffer	2 μL	3 μL^a	5 μL
底物 DNA	2 μL (up to 1 μg)	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
Cfr42I	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

a.本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10×CutFlex Buffer 加入量可适当减少至 2 μL。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

3) 37℃温育 15 min（质粒），或 15~ 30 min （PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）； 4) 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）； 5) 如果使用 CutFlex Color Buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

1) 每种快速内切酶的用量为 1 μL，并根据需要适当扩大反应体系；

2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；

3) 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3. 适用于质粒的扩大反应体系

组分	加入量
DNA	1 μg	2 μg	3 μg	4 μg	5 μg
Cfr42I	1 μL	2 μL	3 μL	4 μL	5 μL
10× CutFlex Buffer 或 10× CutFlex Color Buffer	2 μL	2 μL	3 μL	4 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	30 μL	40 μL	50 μL

不同 DNA 中的酶切位点数量

DNA	酶切位点数量
p615	4
ΦX174	1
pBR322	0
pUC57	0
pUC18/19	0
SV40	0
M13mp18/19	0
Adeno2	33

甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	无影响	剪切受阻	无影响	无影响

在不同反应缓冲液中的活性

CutFlex Buffer	Thermo Scientific FastDigest Buffer	NEB rCutSmart^™ Buffer	Takara QuickCut^™ Buffer
100%	＜12.5%	100%	＜12.5%

注：活性数据来自瀚海限制酶标准反应体系下的检测。

DNA 修饰酶在 Buffer 中的活性

DNA 修饰酶	Buffer	活性
T4 DNA 连接酶（HSM060201）	10× CutFlex Buffer	100%
T4 DNA 连接酶（HSM060201）	10× CutFlex Color Buffer	100%

注：活性数据来自瀚海新酶标准反应体系下的检测；T4 DNA Ligase 需要 ATP 作为辅助因子。