本试剂盒用于中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系表达的生物制品中宿主细胞蛋白（HCP）的残留检测，可以辅助蛋白纯化、过程控制、质量控制等流程中 CHOHCP 残留量的控制。仅供研究使用，不可用于临床。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| CHO 细胞 HCP(宿主蛋白)残留检测试剂盒 | HBP003902-1 | 48T |
| HBP003902-2 | 96T |
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫检测（夹心ELISA）原理，酶标板微孔中包被抗 CHO HCP抗体，加入样本后孵育洗涤，然后加入生物素（Biotin）标记的抗 CHOHCP 抗体孵育洗涤，最后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（SA-HRP）孵育，形成抗体+抗原+抗体-Biotin+SA-HRP 复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色，TMB 在 HRP 的催化下转化成蓝色，经酸的终止作用转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中CHOHCP含量呈正相关,用酶标仪测定吸光度（OD 值）后可根据标准曲线计算样品中 CHOHCP 的浓度。
试剂盒组成
储存条件及有效期
1、未开封试剂 2~8℃保存，有效期 12 个月。
2、试剂开封后 2~8℃保存且需要在 6 周内用完，其中开封的反应板务必连同干燥剂保存于自封铝箔袋中。
所需仪器
1、酶标仪（检测波长 450nm，校正波长650nm）。
2、恒温混匀仪或等效设备（能够保持 37℃和400-600rpm 的振板速度）。
试剂准备
所有试剂组分在使用前需要于室温（25℃± 3℃）平衡 20 分钟，使用后需立即放回 2~8℃保存。
1、10×浓缩洗涤液与纯化水按 1：9 体积比混合成洗涤工作液，未用完的放回冰箱。
2、标准品（0.01mg/mL）用稀释液稀释至100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、12ng/mL、 6ng/mL、3ng/mL、0.7ng/mL、0ng/mL，仅供当次试验使用，稀释方法建议如下：
3、100×检测抗体用稀释液稀释 100 倍配制成检测抗体工作液，使用前 20 分钟按当次试验所需用量准备，仅供当次试验使用。
4、100×酶结合物用稀释液稀释 100 倍配制成酶结合物工作液，使用前 20 分钟按当次试验所需用量准备，仅供当次试验使用。
检测步骤
1、从室温平衡后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条连同干燥剂保存于自封铝箔袋中并放回 2~8℃。
2、提前准备好样本和不同浓度标准品。
3、设置标准品孔和样本孔，建议所有标准品和待测样本进行双复孔测定。标准品孔加入100μL 不同浓度的标准品，样本孔中加入 100 μL 待测样本。用封板膜封住反应孔，37℃振荡（500rpm）孵育 60 分钟。
4、提前准备好洗涤工作液和检测抗体工作液。
5、甩净孔内液体，倒扣于吸水纸上拍干。每孔加 300μL 洗涤工作液，静置 15~30s，甩净孔内液体，倒扣于吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次。
6、每孔加入 100μL 检测抗体工作液，用封板膜封住反应孔，37℃振荡（500rpm）孵育 30分钟。
7、提前准备好酶结合物工作液。
8、甩净孔内液体，倒扣于吸水纸上拍干。每孔加 300μL 洗涤工作液，静置 15~30s，甩净孔内液体，倒扣于吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次。
9、每孔加入 100μL 酶结合物工作液，用封板膜封住反应孔，37℃振荡（500rpm）孵育 30分钟。
10、提前按需取出一定量显色剂于室温避光平衡 20 分钟。
11、甩净孔内液体，倒扣于吸水纸上拍干。每孔加 300μL 洗涤工作液，静置 15~30s，甩净孔内液体，倒扣于吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次。
12、每孔加入 100uL 显色剂，用封板膜封住反应孔，37℃静置避光孵育 15 分钟。
13、每孔加入 50μL 终止液，15 分钟内进行检测，设定酶标仪检测波长为 450nm、矫正波长为 650nm。
检测结果分析
1、各孔 OD450 nm 数值减去各孔 OD650 nm 数值得到各孔光吸收值，再计算各标准品和样本的光吸收值均值。以标准品浓度为横坐标，以对应的光吸收值均值为纵坐标绘制标准曲线。
2、标曲的拟合软件可以用酶标仪自带的软件，也可以用专业的标曲制作软件（如 ELISA Calc）。拟合方式可以选择 Logistic（4P）、三次样条插值等非线性拟合方式。
3、典型校准曲线如下图：
检测性能
1、检测范围：0.7~100ng/mL。
2、检出限：≤0.3ng/mL。
3、最低定量限：0.7ng/mL。
4、精密度：批内变异系数（CV）≤10%，批间 CV≤15%（最低定量限的 CV≤20%）。
5、准确度：回收率 80%~120%（最低定量限回收率 70%~130%）。
6、特异性：100ng/mL 毕赤酵母和 E.coli HCP测值低于 0.3ng/mL。
检测方法的局限性
1、本品仅适用于研究用途，不用于临床诊断。
2、本品仅适用于 CHO 细胞系生产工艺来源的宿主细胞残留蛋白含量检测。
3、样品 pH 应保证在 6.5~8.5 之间，过低或过高的 pH 可能会造成测量值异常。
注意事项
1、不同批次试剂盒不建议混用。
2、样品应澄清，不溶性沉淀应离心去除。
3、样品首次测定时，建议通过梯度稀释确定最小稀释倍数。
4、为保证较好的准确度和重复性，请进行两复孔或三复孔操作。
5、标准品和样品的稀释混匀要轻柔充分，勿产生大量泡沫。
6、加样时应将所加物加入酶标板孔中底部，避免加在孔壁上部。加样时注意不可溅出，不可产生气泡。
7、若发现浓缩洗涤液中有结晶，可在 37℃水浴锅中孵育，待结晶完全溶解后再混匀稀释至工作浓度。
8、洗涤过程中应使洗涤工作液浸泡反应板15~30s 后再甩净，以充分洗涤非特异性吸附的成分。
9、洗涤过程中甩净孔中液体并拍干后应立即加后续溶液，勿让酶标板处于干燥状态，以防影响试剂盒检测性能。
10、检测抗体(100×)和酶结合物(100×)在使用前请快速离心，将管盖中残留的试剂甩到管底，防止试剂的污染和损失。
11、显色剂应是无色或淡黄色透明液体，吸取时务必更换干净的吸头，防止 HRP 污染。如发现已有淡蓝色，请弃用。
12、显色温度和时间对实验结果至关重要，应准确把握。
13、由于叠氮钠会抑制 HRP 活性，使检测值偏低，样本中应避免引入叠氮钠。
快速操作流程
