Bst DNA 聚合酶 V2 来源于 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I,含有 5´→3´DNA 聚合酶活性和强链置换活性, 但缺乏 5´→3´核酸外切酶活性,可用于 DNA 链置换反应 、 等温扩增 LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) 和快速测序等。WS Bst DNA 聚合酶 V2 是在 Bst DNA 聚合酶 V2 的基础上,采用可逆性修饰技术获得的热启动版本,能够在室温条件下抑制 DNA 聚合酶活性,因此可在室温操作并配制反应体系,防止非特异性扩增,提高反应效率,且该版本可冻干。另外,在高温下能够释放其活性,因此无需单独激活步骤。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| WS Bst DNA 聚合酶 V2(无甘油) | HMD7006-01 | 1600 U |
| HMD7006-02 | 8000 U | |
| HMD7006-03 | 80000 U |
产品组分
| 组分 | HMD7006-01 | HMD7006-02 | HMD7006-03 |
| WS Bst DNA 聚合酶 V2(无甘油)(8 U/μL) | 0.2 mL | 1 mL | 10 mL |
| 10× HH Bst V2 Buffer | 1.5 mL | 2×1.5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100 mM) | 1.5 mL | 2×1.5 mL | 2×10 mL |
单位定义
65℃条件下,在 30 min 内将 25 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性物质所需要的酶量定义为 1 个活性单位。
质量控制
• 蛋白纯度(SDS-PAGE):通过 SDS-PAGE 分析,纯度 ≥ 99%;
• 核酸内切酶残留检测:50 μL 反应体系中加入 8 U 本酶和 1 μg λDNA 在 37℃下反应 16 小时,琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生变化。
• 核酸外切酶残留检测:50 μL 反应体系中加入 8 U 本酶和 1 μg λ-Hind Ⅲ digest DNA 在 37℃下孵育 16 小时,琼脂糖凝胶 DNA 谱带不发生变化。
• 切口酶残留检测:50 μL 反应体系中加入 8 U 本酶和 1 μg pBR322 DNA 在 37℃下孵育 16 小时,琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生变化。
• RNase 残留检测:50 μL 反应体系中加入 8 U 本酶和 1.6 μg MS2 RNA 在 37℃下孵育 16 小时,琼脂糖凝胶电泳 RNA 谱带不发生变化。
• 大肠杆菌 DNA 残留检测:120 U 本品中残留的核酸经E.coli 16s rDNA 特异性的 TaqMan qPCR 检测,E.coli 基因组残留≤1 拷贝;
LAMP 反应体系配制
| 组分 | 25 μL 体系 |
| 10× HH Bst V2 Buffer | 2.5 μL |
| MgSO4(100 mM) | 1.5 μL |
| dNTPs(10 mM each) | 3.5 μL |
| SYTO 16 Green(25×)* | 1.0 μL |
| Primer mix** | 6 μL |
| WS Bst DNA 聚合酶 V2(无甘油)(8 U/μL) | 1 μL |
| Template | X μL |
| ddH2O | Up to 25 μL |
*SYTO 16 Green(25×):依据实验需要,可用其他染料替代;
**Primer mix:通过将 20 μM FIP、20 μM BIP、2.5 μM F3、2.5 μM B3、5 μM LF、5 μM LB 等体积混合配制得到。
反应条件
1× HH Bst V2 Buffer 体系里,孵育温度 60℃-65℃。
热失活
80℃,20 min。
应用
1. LAMP 等温扩增;
2. DNA 链置换反应;
3. 高 GC 基因测序;
4. 纳克量级别模板的 DNA 测序。
