Taq DNA 聚合酶单抗(B8)是 Taq DNA polymerase 的鼠源单克隆抗体,与 Taq DNA polymerase 结合后能够有效封闭 DNA 外切酶活性。本品与 Taq DNA polymerase 的亲和力非常高,在 55℃下仍然可以封闭 95% 以上 Taq DNA polymerase 的外切酶活性,因此可以非常有效地抑制低温时错配探针或其它物料的降解,减少非特异性信号。本品只需要在 95℃ 加热 30 s 即可与 Taq DNA polymerase 不可逆解离,释放外切酶活性。 本品尤其适用于基于探针法的荧光定量 PCR 反应等。
外切活性封闭抗体和聚合活性封闭抗体可混合使用,获得双封闭抗体,与 Taq DNA polymerase结合后可同时封闭聚合酶与外切酶活性,进一步提高反应特异性。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Taq DNA聚合酶单抗(B8) | HSM020101 | 100 μL |
质量控制
蛋白纯度:使用 SDS-PAGE 凝胶电泳检测,蛋白纯度不低于 90%。
功能检测:①活性封闭检测:将经 Taq DNA 聚合酶单抗(B8)封闭的 Taq DNA Polymerase 在 50℃孵育 4h 后,其活性释放率低于 5%。
②热启动检测:将经 Taq DNA 聚合酶单抗(B8) 封闭的Taq DNA Polymerase 在95℃孵育30 s 后检测外切酶活性,活性释放≥95%。
核酸内切酶活性检测:将1 μg Taq DNA聚合酶单抗(B8)与 200ng 超螺旋质粒 DNA 在 37℃ 下,共同温育 4h 后,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于 10%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
非特异性内切酶活性检测:将1 μgTaq DNA聚合酶单抗(B8) 与 15ng 双链 DNA 片段在 37℃孵育 16 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测检测双链 DNA 底物无变化。
宿主 DNA 残留检测:使用 CHO 细胞特异性引物探针组,采用荧光定量 PCR 法检测 1 μg Taq DNA 聚合酶单抗(B8),宿主基因组 DNA 残留低于 1copy。
使用方法
反应体系
抗体与 Taq 酶的摩尔比在 3:1 时即可完全封闭,首次使用推荐进行不同摩尔比的测试以达到使用效果,具体过程可参考以下步骤:
1.依据下表配制 Taq DNA 聚合酶单抗(B8) 与 Taq DNA 聚合酶孵育体系(可依据需求进行调整):
| 摩尔比 | 1:1 | 2:1 | 3:1 | 5:1 |
| Taq DNA聚合酶单抗(B8)(1.5 mg/mL) | 16μg | 32μg | 48μg | 80μg |
| Taq DNA 聚合酶a | 10μg | 10μg | 10μg | 10μg |
| Taq 储存液b | To 100μL | |||
a. 不同公司的 Taq 酶分子量可能存在差异, 此表格推荐的用量为按照 Taq 分子量 94 kDa, 抗体分子量 150 kDa 进行计算,实际使用中可按照所用 Taq 的分子量自行调整。
b.Taq 储存液配方:50 mM Tris-HCI, 50mM KCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, pH8.0±0.05@25℃ 。
2.上述体系轻柔混合均匀后置于 37℃水浴中孵育 3h,即可得到终浓度为 0.1 mg/mL 的热启动 Taq 酶。
注意事项
1.本产品仅供科学研究使用,不得用于临床医学诊断及其他非合理用途。
