phi29 DNA Polymerase 来源于 Bacillus subtilis 噬菌体，经基因工程改造后具有卓越的链置换和链亲和力，单次反应可合成长达 70 kb 的 DNA 片段。此外，phi29 DNA Polymerase 具有很强的 3′→5′ 核酸外切酶校对活性，保真度极高；但与此同时，较强的 3′→5′ 外切活性可能导致引物降解，推荐对引物 3′末端进行硫代修饰以防止降解。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
|---|---|---|
| phi29 DNA聚合酶 | HSM020081-01 | 500U |
| HSM020081-02 | 2500U |
产品组分
| 组分 | HSM020081-01 | HSM020081-02 |
|---|---|---|
| phi29 DNA聚合酶（10U/μL） | HSM020081-01A 50 μL | HSM020081-02A 5×50 μL |
| 10×phi29 Buffer | HSM020081-01B 1mL | HSM020081-02B 2×1mL |
活性定义
在 50℃条件下，50μL 反应体系中，1 小时内完全切割 1 μg 内部对照品 DNA 所需要的酶量定义为 1 个活性单位。非特异性内切酶活性 37℃下，在 20μL 反应体系中将 10Uphi29 DNA 聚 合 酶 ， 与 200ng 超 螺 旋 质粒 DNA 共同温育 4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
产品应用
1. 滚环扩增（RCA）
2. 全基因组扩增（WGA）
3. 多重置换扩增（MDA）
4. 单细胞基因组扩增
5. 致死基因的无细胞体系的克隆等。
质量控制
蛋白纯度：使用 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性：37℃下，在 20 μL 反应体系中将 10U phi29 DNA Polymerase 与 200ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性：37℃下，在 20 μL 反应体系中将 10U phi29 DNA Polymerase 与 15ng 双链 DNA 片段共同温育 16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
RNase 活性：37℃下，在 10 μL 反应体系中将 10U phi29 DNA Polymerase 与 500ng RNA 共同温育 1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，超过 90%的 RNA 保持完整。
宿主 DNA 残留：本品中大肠杆菌宿主细胞 DNA 残留量低于 1 copy/10U。
使用方法
1. 在 EP 管中配制如下反应体系：
| 试剂 | 使用量 |
|---|---|
| 模板a | 1 μL |
| 10×phi29 Bufferb | 2 μL |
| dNTP（10 mM） | 2 μL |
| Random Primer（100 μM）c | 2 μL |
| Pyrophosphatase, Inorganic（Yeast）d（0.1 U/μL） | 1 μL |
| ddH2O | Up to 19 μL |
a. 对于基因组模板，推荐用量 1~50ng；对于质粒模板，推荐用量 0.1~10ng。
b. 反应缓冲液中含有 DTT，长期储存或反复冻融 10 次后请在使用前加入终浓度为 4 mM 的 DTT。
c. 推荐使用 3′硫代修饰的引物；若使用未修饰的引物，则建议提高随机引物用量，终浓度不超过 25 μM。
d. Pyrophosphatase, Inorganic（Yeast）（货号：HBP000501）可选加，加入 Pyrophosphatase, Inorganic（Yeast）可减少副产物的产生，提高目的片段产量。
2. 95℃ 3min，冰上冷却 3min；加入 1 μL phi29 DNA Polymerase（10U/μL）。
3. 30℃反应 1~16h，65℃ 10min。
注意事项
1. 本制品灵敏度极高，注意防止模板污染。
2. 本品在 30~37℃ 均有活性，可根据具体实验需求调整反应温度。
3. 本产品仅供科学研究使用，不得用于临床医学诊断及其他非合理用途。
