即用型预混液。热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
该预混液包含5×gDNA digester Mix和4×SuperMix plus。5×gDNA digester Mix可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。4×SuperMix plus只需加入RNase-free H2O即可进行逆转录反应，并同时终止gDNA digester的作用，保证cDNA的完整性。
该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/Oligo(dT)18 primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR® Green和探针法qPCR。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 1st Strand cDNA Synthesis Kit（20 μL/T，gDNA digester） | HSM030011 | 100T |
| HSM030011-01 | 10T |
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 100T规格 | 10T规格 |
| A | RNase-free H2O | 2×1 mL | 1 mL |
| B | 5×gDNA digester Mix | 320 μL | 32 μL |
| C | 4×SuperMix plus | 500 μL | 50 μL |
注：4× SuperMix plus 含有 gDNA digester 抑制剂。
使用方法
第一链 cDNA 合成操作步骤：
1. 残留基因组 DNA 去除
在 RNase-free 离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育 2 min。
| 温度 | 时间 |
| 55℃ | 15 min |
| 85℃ | 5 sec |
| 组分 | 使用量 |
| RNase-free H2O | To 15 μL |
| 5× gDNA digester Mix | 3 μL |
| Total RNA | 10 pg-5 μg* |
| or mRNA | 10 pg-500 ng* |
注：*20 μL 逆转录反应体系建议 Total RNA 的投入量不超过 1 μg。如果目的基因的表达丰度低，最多投入 5 μg Total RNA，否则 RNA 投入量过高，可能会超过后续定量 PCR 的线性范围。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL 体系）
| 组分 | 使用量 |
| 第 1 步的反应液 | 15 μL |
| 4× SuperMix plus | 5 μL |
| 温度 | 时间 |
| 25℃ | 5 min |
| 55℃ | 15 min |
| 85℃ | 5 min |
在第 1 步的反应管中直接加入 4× SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀。
3. 逆转录标准程序设置：
注：逆转录温度推荐使用 55℃。对于高 GC 含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到 60℃。
逆转录快速程序设置：
注：逆转录快速程序适用于中低 GC 含量（≤55%）或者简单模板。
※逆转录产物可立即用于 qPCR 反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
注意事项
1. 5× gDNA digester Mix 和 4× SuperMix plus 含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取；
2. 如果加入 RNA 模板体积较大（如超过 2 μL），请确保 RNA 是溶于水中而不是 TE 中，因为 TE 会对 gDNA 去除以及逆转录反应产生抑制；
3. 反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免 RNase 污染；
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；
5. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
