三代逆转录去基因组 DNA 一管化预混液是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链 cDNA 合成试剂盒，包含热稳定的 M-MLV GIII Reverse Transcriptase 及其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链 cDNA 合成所需的所有组分，仅需加入 RNA 模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的 cDNA 主要用于下游 qPCR 实验。
从细胞中提取的 RNA 往往存在基因组 DNA 污染，如果逆转录前不将其去除，下游 qPCR 反应时基因组 DNA 与 cDNA 会同时被扩增（尤其当引物设计在同一外显子上时），从而影响基因表达定量准确性。本试剂盒采用 dsDNase 高效去除基因组 DNA 污染，dsDNase 能够特异性消化双链 DNA（dsDNA 或 DNA-RNA 杂合链中的 DNA 链），并且具有热敏感性，在逆转录温度下即可快速不可逆地失活。与传统使用 DNase I 去除基因组 DNA 污染的方法相比，dsDNase 无需额外加入 EDTA 进行失活，不仅节省实验时间，而且降低了对逆转录反应的抑制。
可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组 DNA 污染与逆转录分开进行的操作方法，或者去基因组污染与逆转录一步法进行的操作方法。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 三代逆转录去基因组DNA一管化预混液 | HSM080011 | 100rxn |
产品组分
| 组分 | 规格 |
| 三代逆转录去基因组DNA一管化预混液 | HSM080011A 400 μL |
| dsDNase | HSM080011B 2×50 μL |
| 10× dsDNase Buffer | HSM080011C 200 μL |
| Nuclease-Free Water | HSM080011D 2×1 mL |
使用方法
1.针对基因组 DNA 含量低的 RNA 样品（推荐方案）
①反应体系按下表配置（冰上操作）：
| 组分 | 使用量 |
| 模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
| 三代逆转录去基因组 DNA 一管化预混液 | 4 μL |
| dsDNase | 1 μL |
| Nuclease-Free Water | To 20 μL |
a. 推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。
②轻柔吸打混匀，瞬离；
③37℃孵育 2 min，去除基因组 DNA 污染；
④55℃孵育 15 min；
⑤反应结束后，85℃孵育 5 min 终止反应；
⑥迅速将获得的 cDNA 置于冰上，用于后续实验；或立即保存于-20℃。
2.针对基因组 DNA 含量高的 RNA 样品
（1）基因组 DNA 污染去除
①反应体系按下表配置（冰上操作）：
| 组分 | 使用量 |
| 模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
| dsDNase | 1 μL |
| 10× dsDNase Buffer | 1 μL |
| Nuclease-Free Water | To 10 μL |
a. 推荐使用试剂盒提取的 RNA 作为模板。
②轻柔吸打混匀，瞬离；
③37℃孵育 2 min，去除基因组 DNA 污染；
注：若 RNA 中基因组 DNA 污染严重，可适当延长 37℃孵育时间至 5 min。
④65℃孵育 2 min，使 dsDNase 失活，冰上放置。
（2）第一链 cDNA 合成
①反应体系按下表配置（冰上操作）：
| 组分 | 体积 |
| 实验①反应产物 | 10 μL |
| 三代逆转录去基因组 DNA 一管化预混液 | 4 μL |
| Nuclease-Free Water | To 20 μL |
a. 推荐使用试剂盒提取的 RNA 作为模板。
②轻柔吸打混匀，瞬离；
③50℃孵育 15 min；
注：若目标 RNA 不含 Poly(A)结构，可预先 25℃温育 10 min。
④65℃孵育 2 min，使 dsDNase 失活，冰上放置。反应结束后，85℃孵育 5 min，终止反应；
⑤将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA 溶液置于-20℃储存，建议不超过 1 周；置于-80℃可长期储存。
注意事项
1.预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，不仅适用于包含 Poly(A)结构的真核生物 mRNA，也适用于不含 Poly(A)结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。
2.由于随机引物会在 RNA 任意位置开始逆转录，因此不建议使用本产品进行真核生物全长 cDNA 克隆。如需获得真核生物的全长 cDNA，建议使用：三代逆转录可选引物预混液（去基因组）（货号：HSM080041）。
