本产品适合于从各种浓度的琼脂糖凝胶中回收 60bp-20k bp DNA，也适合于从 PCR 产物中，酶促反应液中，或由各种方法获得粗制基因组 DNA 中回收纯化 DNA。试剂盒采用硅胶柱纯化技术，可以在 10~15 分钟完成纯化工作。DNA 回收效率高达 80%，纯化的 DNA 可直接用于自动测序，连接，酶切，PCR，标记等。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| DNA纯化试剂盒 | HSM010071-01 | 50T |
| HSM010071-02 | 200T |
产品组分
| 组分 | HSM010071-01 | HSM010071-02 | 主要组分 | 组分功能 |
| 包装次数 | 50次 | 200次 | / | / |
| Buffer GDP | 30mL | 110mL | 胍盐/醋酸钠 | 溶解凝胶 |
| Buffer DW1 | 18mL | 70mL | 盐酸胍/异丙醇 | 洗涤除蛋白 |
| Buffer DW2 | 12mL | 50mL | Tris/NaCl | 脱盐 |
| Elution Buffer | 10mL | 20mL | 10mM Tris, pH8.5 | 洗脱液 |
| 纯化柱 B10 | 50个 | 2×100个 | 玻璃纤维滤膜 | 吸附核酸 |
| 2mL收集管 | 50个 | 2×100个 | 收集管 | 收集滤液 |
准备事项
按瓶子标签所示，加入 4 倍体积的无水乙醇稀释 BufferDW2，于室温保存。
实验步骤
1. 琼脂糖凝胶 DNA 回收：
(1) 切胶：配制合适浓度的琼脂糖凝胶，电泳分离 DNA 片段。当 DNA 片段分离后，把凝胶放置于紫外灯下，快速切下含目的 DNA 片段的凝胶，并尽量去除多余的凝胶。
(2) 溶胶：称取凝胶块的重量，并转移至 1.5或 2.0mL 离心管中。按 100mg 凝胶块相当100µL体积计算，加入1.5倍体积BufferGDP,50~55ºC 水浴 10 分钟，让凝胶块完全溶解。水浴期间，颠倒或涡旋混匀 1-2 次让凝胶完全溶化。若凝胶块重量为 200mg，则加入 300µLBufferGDP。试剂盒配套的 BufferGDP 可确保每次处理 300mg 凝胶，需要更多的 BufferGDP 请另外订购。
(3) 过柱吸附：短暂离心收集管壁上的液滴。将纯化柱B10套在2mL收集管中，把≤750µL溶胶液转移至柱子中。12,000×g 离心 30~60秒。
(4) 过柱吸附：(可选：溶胶液超过 750µL)倒弃滤液，把柱子套回收集管中。把剩余溶胶液转移至柱子中。12,000×g 离心 30~60 秒。
(5) 去除残胶：倒弃滤液，把柱子套回收集管中。加入300µL Buffer DW1 至柱子中，12,000×g 离心 30~60 秒。
(6) 脱盐：倒弃滤液，把柱子套回收集管中。加入 500µL BufferDW2 至柱子中，12,000×g 离心 30~60 秒。
(7) 脱盐：倒弃滤液，把柱子套回收集管中。加入 500µL BufferDW2 至柱子中，12,000×g 离心 30~60 秒。
(8) 干燥：倒弃滤液，把柱子套回收集管中。12,000×g 离心 3 分钟。
(9) 洗脱：把柱子套在 1.5mL 离心管中，加入20~50µL ElutionBuffer 至柱子膜中央。放置1~3 分钟。12,000×g 离心 1 分钟。丢去柱子，把 DNA 保存于-20℃。若需要获得最高产量，建议重复第 9 步进行第二步洗脱。回收大于 3kb 以上的片段时，最好把 ElutionBuffer 预热至 55ºC。
2. 从反应液中纯化 DNA
该方案适合于从 PCR 产物，酶促反应液，或粗制的 DNA(包括基因组 DNA)中回收纯化DNA。该方案可高效地去除各种核苷酸，引物，引物二聚体，盐分子，酶等杂质。DNA 回收效率可高达 80~90%。以下离心都必须在室温下进行。
(1) 短暂离心 PCR 产物，酶促反应液，或粗制的基因组 DNA 产物，用移液枪测量其体积，并转移至灭菌的 1.5 或 2mL 离心管中。
• 若样品体积小于 100µL，用灭菌水调整至100µL。
• 回收粗制的基因组 DNA 时，用灭菌水稀释至 250µL，以提高回收效率。
• 若核酸总量超过 5µg 时，稀释至 250µL，以提高回收效率。
(2) 调整结合条件：加入等倍体积的 BufferGDP，颠倒或涡旋混匀。若需回收小于 100bp DNA 片段，再加入 3 倍样品体积的无水乙醇。若 DNA 含量超过 20ug 时，加入等倍样品体积的 BufferGDP 和异丙醇，有利于提高回收率。
(3) 过柱吸附：将纯化柱 B10 套在收集管中。把全部混合液转移至柱子中。12,000×g 离心30~60 秒。
(4) 脱盐：倒弃滤液，把柱子套回收集管中。加入 500µLBufferDW2 至柱子中。12,000×g 离心 30~60 秒。
(5) 脱盐：倒弃滤液，把柱子套回收集管中。加入 500µLBufferDW2 至柱子中。12,000×g 离心 30~60 秒。
(6) 干燥：倒弃滤液，把柱子套回收集管中。12,000×g 离心 3 分钟。
(7) 洗脱：把柱子套在 1.5mL 离心管中，加入30~50µL ElutionBuffer 至柱子膜中央。放置1 分钟。12,000×g 离心 1 分钟。若需要获得最高产量，建议重复第 7 步进行第二次洗脱。回收大于 3kb 以上的片段时，最好把 ElutionBuffer 预热至 55ºC。
(8) 丢去柱子，把 DNA 保存于-20ºC。
常见问题
1. 回收效率低
（1）凝胶未充分溶解：溶胶时，50~55ºC 水浴 7~12 分钟，其间颠倒混匀数次，让凝胶充分溶解。
（2）凝胶用量过多：过量的凝胶会降低回收率，切胶时尽量去除多余的凝胶。
（3）溶胶液不足：BufferGDP 加入量不能低于凝胶重量的 1 倍。处理>2%凝胶时，BufferGDP 加入量最好控制在 2~3 倍。
（4）洗脱不充分：建议用洗脱液洗脱两次，以获得最高的回收率。洗脱液必须加入柱子的膜中央。洗脱效率取决于洗脱体积和次数。
2. 回收后出现杂带
DNA 变性：有些 DNA 片段对温度比较敏感，杂带有可能是单链的 DNA。降低溶胶温度至37~50ºC。降低温度，可延长溶胶时间至20~40 分钟让凝胶充分溶解。
3. 盐污染
A260/230 太低：BufferGDP 溶液中的异硫氰酸胍在A230中有较高的吸收峰。使用该产品，A260/230 通常小于 1.0。实验表明，该产品得到的 DNA 不会影响下游的运用，包括测序，连接，定量 PCR，PCR，酶切等。
4. 连接不理想
（1）乙醇污染：洗脱 DNA 前，打开柱子的盖子，空气干燥 10~15 分钟以彻底去除乙醇。
（2）核酸变性：降低熔胶温度至 37~50ºC。降低温度，可延长溶胶时间至 20~40 分钟让凝胶充分溶解。降低温度能有效减少核酸的脱嘌呤和变性的影响。
注意事项
本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
