本产品采用柱式纯化技术，适合于从动物组织、深加工动物源样品、培养细胞、脱落细胞、血液、唾液、拭子、血斑、细菌等样品中提取高纯度 DNA。提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，消化后的提取过程只需 20 分钟。得到的 DNA 可直接用于 PCR，定量 PCR，Southern Blot，病毒 DNA 检测、二代测序等实验。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 通用DNA提取试剂盒 | HSM010081-01 | 24T |
| HSM010081-02 | 100T |
产品组分
| 组分 | HSM010081-01 | HSM010081-02 | 主要组分 | 组分功能 |
| 纯化次数 | 24次 | 100次 | / | / |
| 纯化柱 B10 | 24个 | 100个 | 玻璃纤维滤膜 | 吸附核酸 |
| 2ml Collection Tubes | 24个 | 100个 | 塑料管 | 收集滤液 |
| Buffer ATL | 10ml | 30ml | Tris/EDTA/SDS | 消化和裂解 |
| Buffer AL | 10ml | 30ml | 盐酸胍/吐温20 | 蛋白变性和增溶 |
| Buffer DW1 | 20ml | 60ml | 盐酸胍/乙醇 | 洗涤除蛋白 |
| Buffer DW2 | 6ml | 25ml | Tris/NaCl | 洗涤除盐离子 |
| Proteinase K Solution | 0.6ml | 2.5ml | 蛋白酶K | 消化酶 |
| Elution Buffer | 10ml | 20ml | 10mM Tris, pH8.5 | 洗脱液 |
准备事项
按瓶子标签所示，加入 4 倍体积的无水乙醇稀释 Buffer DW2，于室温保存。
实验流程
A. 固体组织类样品(不超过 50mg)
1. 把样品剪切成小碎片并转移至 1.5ml 离心管 中。 加 入 250µl Buffer ATL 和 20µlProteinase K Solution， 55 ℃ 振 荡 温 浴30~120 分钟或直到样品完全消化。
（1）正确的组织用量才能获得理想结果，过多样品会降低产量和纯度。脾脏和胸腺富含DNA，不要超过 10mg。肝脏、肾脏、肺等组织不超过 20mg，肌肉和皮肤可用到 50mg 以提高 DNA 产量。小鼠尾巴最大用量为 1.2cm，大鼠尾巴最大用量为 0.6cm。处理乙醇浸泡保存样品，用灭菌水清洗或晾干后进行操作。
（2）把组织块尽量切成小碎片可缩短消化时间。液氮研磨、玻璃匀浆器处理可达到缩短消化时间的目的。消化时间取决于样品类型和匀浆效果。一般组织样品需 0.5~2 小时，老鼠尾巴需 2~4 小时，55℃温育过夜没有负面影响。
（3）处理加工的动物源样品，如腊肉、肉松、皮革等样品，取 30~100mg 样品，在适量的PBS 或生理盐水剪碎或研磨，2,500×g 离心5~10 分钟得细胞沉淀，去除废液中的油脂或添加物。由于加工后动物源样品中含有添加物不同，可根据实际情况用 PBS、生理盐水、乙醇、氯仿等试剂进行清洗，最后得沉淀后再加入 250~500µl ATL 和 20µl Proteinase K Solution，55℃消化过夜。
（4）处理毛发、羽毛、指甲等样品，消化时再加入 10µl 1M DTT 辅助消化。
（5）去除 RNA：加入5µl RNase Solution（使用 RNase A，货号 HMD3902，配制终浓度为25mg/mL 的 RNase Solution）至消化液中，混匀后室温放置 10-15 分钟。
去除未消化杂质：若消化液不透亮或存在颗粒物，13,000 x g 离心 3 分钟，转移上清液至新的离心管中。
2. 加入 250µl Buffer AL，涡旋混匀 10 秒，70℃温浴 10 分钟。若消化液不粘稠，可以省略温浴步骤。Buffer AL 和无水乙醇可以预混后一起加入以简化操作。
3. 加入 250µl 无水乙醇，涡旋混匀 15 秒，按第 5 步进行操作。处理富集 DNA 样品（肝脏或脾脏），加入无水乙醇可能会有沉淀形成，属正常现象。
B. 细胞类样品（不超过 5×106）
1. 取适量细胞培养液、羊水、尿液、肺泡灌洗液等体液至离心管中，2,000×g 离心 10 分钟收集细胞。小心吸弃培养液，余下 100µl残液和细胞沉淀，涡旋或弹打松散细胞。体液用量取决于样品类型，5-15ml 羊水，10-50ml 尿液。肺泡灌洗液含有痰液，先用1%DTT 溶液使之充分液体再进行离心操作。
2. 加入150µl Buffer ATL和20µl Proteinase K Solution 至样品中，涡旋混匀。55℃温浴 10~30 分钟。
去除 RNA：加入 5µl RNase Solution（使用RNase A，货号 HMD3902，配制终浓度为25mg/mL 的 RNase Solution），混匀。室温放置 10-15 分钟。
3. 加入250µl Buffer AL至样品中，涡旋5秒。70℃温浴 10 分钟。若消化液不粘稠，可以省略温浴步骤。Buffer AL 和无水乙醇可以预混后一起加入以简化操作。
4. 加入 250µl 无水乙醇至样品中，涡旋 5 秒，按第 5 步进行操作。
C. 血液/唾液等液体液样品(250µl)
1. 在 1.5ml 离心管中，加入 20µl Proteinase K Solution 和 250µl 血液、血浆、细胞悬液，唾液、拭子浸泡液等样品。
（1）红细胞带核血液：鸟类/鱼类等非哺乳类动物血液的红细胞是带核的，其 DNA 含量极为丰富。在 1.5ml 离心管中，加入 10~50µl抗凝血液，用 Buffer PBS 或生理盐水稀释至250µl。
（2）凝固血块：用电动/玻璃匀浆器或其它方法将凝血块匀浆成均一的液体。
（3）血液和体液：处理人血液黄层/淋巴细胞等浓缩样品，浓缩前全血不要超过 1ml，太多淋巴细胞会造成裂解液太粘稠而影响提取。其它哺乳动物血液建议先用 150µl，用灭菌水补至 250µl。若血液或体液样品不足 250µl 时，用灭菌水补足 250µl。
2. 加入 250µl Buffer AL，上下翻转 5-10 次，涡旋 10 秒。70℃振荡温浴 10 分钟。充分混匀非常重要。处理粘稠样品时，先上下翻转数次后再涡旋并达到旋涡效果。恒温金属浴速度调至 800-1500rpm。水浴温育时，温浴期间颠倒翻转 2 次以加速消化。
3. 加入 250µl 无水乙醇，涡旋 10 秒。按第5 步进行操作。
D. 血斑、精斑样品
1. 用打孔器从干血片中切出 3~5 片直径为3mm 的圆片，转移至 2.0ml 离心管中。加入300µl Buffer ATL 和 20µl Proteinase K Solution，55℃振荡（1200~1400rpm）温育 60 分钟。
处理更多血片时，要相应加大 Buffer ATL 和Proteinase K Solution 用量，充分振荡是产量的关键。处理精斑样品时，加入 10µl 1MDTT 辅助消化。
2. 加入 200µl Buffer AL 至样品中，70℃振荡（1200~1400rpm）15 分钟。
3. 13,000×g离心1分钟收集管壁上的液滴。转移 450~500µl 消化液至 1.5ml 离心管中。
4. 加入 250µl 无水乙醇，涡旋混匀 5 秒。按第 5 步进行操作。
E. 细菌（不超过 2×109 个细菌）
1. 取适量细菌培养液、尿液、匀浆液、拭子浸泡液、食物发醇液等样品至离心管中，10,000×g 离心 3 分钟收集细菌，小心吸弃上清液。
（1）革兰氏阴性细菌：细菌沉淀用灭菌水或TE 重悬，或直接取 300µl 菌液或液体样品，按第 2 步进行操作。
（2）革兰氏阳性细菌：细菌沉淀中用 300µlBuffer TE和10µl Lysozyme(100mg/ml)涡旋重悬；液体样品直接取 300µl 并加入 10µlLysozyme(100mg/ml)混匀。室温放置 15 分钟。
2. 加入 200µl Buffer AL 和 20µl Proteinase K Solution，涡旋 10 秒，65℃温浴 20 分钟。
（1）若消化液不透亮或存在明显的颗粒，10,000×g 离心 1 分钟去除未消化杂质。
（2）去除RNA：加入5µl RNase Solution（使用 RNase A，货号 HMD3902，配制终浓度为25mg/mL 的 RNase Solution）混匀。室温放置 10-15 分钟。
3. 加入 250µl 无水乙醇，涡旋混匀 5 秒。按第 5 步进行操作。
F. 酵母（不超过 1×107）
1. 取适量的酵母培养液至离心管中，10,000×g 离心 1 分钟收集细胞，小心吸弃上清液。加入 300µl Buffer ATL 和 300mg 酸性玻璃珠(0.4-0.5mm），高速涡旋 10 分钟，90℃温浴 15 分钟。
去除 RNA：加入 5µl RNase Solution（使用RNase A，货号 HMD3902，配制终浓度为25mg/mL 的 RNase Solution）混匀。室温放置 10-15 分钟。
2. 10,000×g 离心 1 分钟，转移 250µl 匀浆液至新的离心管中。
3. 加入 250µl Buffer AL 和 20µl Proteinase K Solution 至样品中，涡旋 5 秒。70℃温浴10 分钟。
4. 加入 250µl 无水乙醇至裂解液中，涡旋混匀 5 秒。按第 5 步进行操作。
5. 过柱纯化：把纯化柱 B10 装在 2ml 收集管中。转移混合液(包括沉淀)至柱子。12,000×g 离心 1 分钟。
堵柱：若这一步产生堵柱现象，增加离心速度至 15,000×g。
6. 倒弃滤液，把柱子装回收集管。加入 500µlBuffer DW1 至柱子中，12,000×g 离心 1 分钟。
7. 倒弃滤液，把柱子装回收集管中。加入750µl Buffer DW2 至柱子中，12,000×g 离心1 分钟。处理低核酸含量的样品时，得到的 DNA 浓度低于 50ng/µl，建议把 Buffer DW2 分成两次清洗，每次用 500µl，可以稳定 A260/230 比值。
8. 倒弃滤液，把柱子装回收集管中。12,000×g 离心 2 分钟。
9. 将柱子装在新的 1.5ml 离心管中。向纯化柱中间部位滴入 50~100µl ElutionBuffer，室温放置 3 分钟，12,000×g 离心 1 分钟。
10. 向纯化柱 B10 再滴入 50~100µl ElutionBuffer，室温放置 3 分钟。12,000×g 离心 1分钟。
11. 丢弃 DNA 结合柱，把 DNA 保存于 2~8℃，长期保存需保存于-20℃。
注意事项
本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
