本试剂盒采用双抗体夹心法原理，酶标板微孔中包被抗 DNaseI 抗体，加入样本和辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体孵育，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，经酸的终止作用转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中 DNase I 的含量呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，根据标准曲线计算样品中 DNase I的浓度。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| DNase I 残留检测试剂盒 | HBP003806-1 | 48T |
| HBP003806-2 | 96T |
产品性质
本试剂盒用于定量检测样本中 DNaseI 的含量。
运输及保存方法
1. 试剂盒标准品（0.1mg/ml）于-25℃~-15℃保存，其余组分于 2~8℃储存，避免强光直射，有效期 12 个月。
2. 包被条拆封使用后，应将剩余包被条密封，在 2~8℃储存，在有效期内使用。
3. 试剂盒其他组分使用后要及时放回到对应的储存条件，在有效期内使用。
试剂盒组成
| / | 组分 | HBP003806-1 | HBP003806-2 |
|---|---|---|---|
| 1 | 反应板 | 8×6孔 | 8×12孔 |
| 2 | 酶标试剂(100x) | 60μL | 120μL |
| 3 | 样品稀释液 | 30mL | 2×30mL |
| 4 | 酶标试剂稀释液 | 6mL | 12mL |
| 5 | 显色剂 | 6mL | 12mL |
| 6 | 终止液 | 3mL | 6mL |
| 7 | 浓缩洗涤液(20x) | 15mL | 30mL |
| 8 | 标准品(0.1mg/mL) | 25μL | 50μL |
| 9 | 封板膜 | 2张 | 4张 |
| 10 | 说明书和COA | 各1份 | 各1份 |
检测流程图
所需仪器和试剂
1. 酶标仪(含 450nm 波长，建议含有双波长检测模式，主副波长分别为450nm和650nm)。
实验前准备
1. 将本次实验所用试剂平衡至室温(18-25℃)。
2. 20×浓缩洗涤液用纯化水按 1：19 体积比稀释成洗涤工作液。
3. 将酶标试剂管和标准品管 1000rpm 在使用前离心 30s，以避免管壁及管盖上残留试剂。
4. 将 100×酶标试剂在使用前用稀释液作100 倍稀释后使用。
5. 将DNase I标准品用稀释液稀释至32、16、8、4、2、1、0.5、0 ng/mL。稀释方法建议如下：
| 编号 | 终浓度（ng/μL） | 稀释方法 | |
|---|---|---|---|
| 稀释液 | 工作标准品加量 | ||
| / | 1000 | 198μL | 2μL 0.1mg/mL 标准品 |
| A | 32 | 484μL | 16μL 1000ng/mL 标准品 |
| B | 16 | 250μL | 250μL A 溶液 |
| C | 8 | 250μL | 250μL B 溶液 |
| D | 4 | 250μL | 250μL C 溶液 |
| E | 2 | 250μL | 250μL D 溶液 |
| F | 1 | 250μL | 250μL E 溶液 |
| G | 0.5 | 250μL | 250μL F 溶液 |
| H | 0 | 250μL | / |
检测步骤
1. 从室温平衡后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条加盖封板膜后用自封袋密封放回2~8℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加入不同浓度的标准品 100μL，样本孔中加入待测样本 100μL。
*当不能够确定待测样品中的 DNase I 的含量时，应当用样品稀释液做多个稀释倍数做检测，以免含量过高不能够读取有效数值。
3. 用封板膜封住反应孔，37℃静置反应60min。
4. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(300μL)，静置 30s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 4 次。
5. 标准品孔和样本孔中每孔加入工作浓度的酶标试剂溶液 100μL，用封板膜封住反应孔， 37℃静置反应 60min。
6. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(300μL)，静置 30s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 4 次。
7. 每孔加入单组分底物显色液 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃静置避光反应 15min。
8. 每孔加入终止液 50μL，立即进行检测，设定酶标仪波长于 450nm 处(建议用双波长450nm/650nm）。
检测结果的解释
1. 取标准品、空白对照、样本的平均光吸收值，以标准品浓度为横坐标，标准品光吸收平均值为纵坐标绘制标准曲线。(双波长检测模式下的光吸收值为 450nm 减去 650nm）。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如 curve expert 1.3 或 ELISA Calc (建议使用四参数拟合曲线计算方法绘制标准曲线)等。
检测性能
1. 检出限：检出限＜0.1ng/mL
2. 定量限：定量限 0.5ng/mL
3. 精密度：变异系数＜10%
4. 回收率： 80%~120%
5. 线性范围： DNase I 检测线性范围 0.5-32ng/mL
注意事项
1. 显色温度和时间对实验结果至关重要，应准确把握。若出现按常规操作流程，测值超出仪器可检测范围现象，可适当减少显色时间。
2. 洗涤过程中应使洗涤液浸泡反应板 15-30s后再甩干，以充分洗涤非特异性吸附的成分。
3. 所有试剂使用前应充分摇匀，加样时应将所加样物加入酶标板孔中底部，避免加在孔壁上部，加样时注意不可溅出，不可产生气泡。
4. 若发现浓缩洗涤液中有结晶，可在 37℃水浴锅中孵育，待结晶完全溶解后再混匀稀释至工作浓度。
5. 样本中应避免引入叠氮化钠(NaN3），叠氮化钠会破坏辣根过氧化酶活性，使检测值偏低。
6. 实验操作过程中要严格避免 RNase 污染。
7. 不可使用摇床代替振板机。
8 本产品仅供科学研究使用，不得用于临床医学诊断及其他非合理用途。
