SgeI可切割在单链或双链DNA上含有5-甲基胞嘧啶的 DNA 靶标。SgeI 限制性内切酶可识别 CNNG(9/13)^位点，并于 37℃下在其独特的缓冲液中的切割效果最佳。为确保一致的性能，该酶 Storage Buffer 中包含预混合 BSA，其可增强酶的稳定性，并与 DNA 制剂中可能存在的污染物相结合。SgeI 可识别特异性位点，其识别序列和切割位点如下：
SgeI 可识别与切割含有 5-mC 位点的 DNA 靶标序列，一条链或双链甲基化均可被识别。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| 内切酶SgeI | HSM050801 | 250 U |
产品组分
| 组分 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| SgeI(5 U/μL) | HSM050791A | 50 μL |
| 10× SgeI Buffer | HSM050791B | 1 mL |
运输及保存方法
-25~-15℃运输与保存。
建议反应条件
1×SgeI 缓冲液； 37℃温育； 参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件
80℃温育 20 min。
酶活定义
在 1×SgeI Buffer 条件下，1 μg pUC19-SgeI + DNA(Dcm )在50 μL反应体系中37℃孵育1 h， 不断增加酶量，直至酶切产物 DNA 带型不随着酶量的增加而发生变化，此时酶量定义为 1 U。
质量控制
核酸内切酶残留检测：将 3 U SgeI 与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。
核酸外切酶残留检测：将 5 U SgeI 与双链 DNA 底物在 37℃温育 1 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。
使用方法
1. DNA 酶切流程
(1)在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系
| 组分 | DNA |
|---|---|
| ddH2O | To20 μL |
| 10× SgeIBuffer | 2 μL |
| 底物DNA | 2 μL(0.5~2 μg) |
| SgeI(5 U/μL) | 0.2~1 μL |
| Total | 20 μL |
(2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋）， 然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
(3) 37℃温育 1 h;
(4)热失活（可选）：80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应。
注：反应体系可以按照比例放大或者缩小。反应时间建议不超过 1 h。
甲基化修饰影响
Dam 甲基化：无影响
Dcm 甲基化：总是切割被 Dcm 甲基转移酶 甲基化的 DNA
CpG 甲基化：CpG 甲基化序列重叠的靶点
EcoKI 甲基化：无影响
EcoBI 甲基化：无影响
注意事项
• 底物至少需要 2 个 SgeI 识别序列才能有效酶切。
• 甲基化DNA完全酶切取决于SgeI识别位点的数量，另外由于识别位点酶切产生的DNA 产物会促进 SgeI 的非特异性酶切，因此建议酶切时优化 SgeI 酶量用于酶切反应。
