SspDI属于常规限制酶系列，可识别G▼GCGCC序列。不同于快速内切酶，SspDI需要较长时间酶切以实现DNA底物的完全切割，使用反应缓冲液CutFlex Buffer，可实现双酶切。
同裂酶：KasI, DinI, EgeI, EheI, Mly113I, NarI, PluTI, SfoI
注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| SspDI (10 U/μL) | HSM050861 | 250 U |
产品组分
| 组分 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| SspDI (10 U/μL) | HSM050861A | 25 μL |
| 10× CutFlex Buffer | HSM051001 | 1 mL |
| 10× CutFlex Color Buffer | HSM051011 | 1 mL |
活性定义
1活性单位(U)是指在50μL反应体系中，37℃1h内完全酶切1µg pBR322所需的酶量。
运输及保存方法
-25~-15℃运输与保存。
推荐反应条件
1. 1×CutFlex缓冲液；
2. 37℃温育；
3. 参照“DNA酶切流程”配制反应体系。
失活条件
80℃温育20min。
质量控制
超长时间温育检测
最适反应温度下，将10U SspDI与1μg pBR322共同温育16h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。
酶切-连接-再酶切检测
最适反应温度下，使用10U SspDI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
使用方法
DNA酶切流程
在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 组分 | 体积 |
|---|---|
| ddH2O | Up to 50 μL |
| 10× CutFlex Buffer | 5 μL |
| 底物DNAa | 1 μg |
| SspDI (10 U/μL) | 1 μL |
| Total | 50 μL |
a:DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响SspDI酶活性。
1. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
2. 37℃温育1~16h；
3. 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
注意事项
1. 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；
2. 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA或乙醇等)相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。
DNA中的酶切位点
| λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 4 | 1 | 1 | 0 | 1 | 20 |
甲基化敏感性
| Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
|---|---|---|---|---|
| 无影响 | 无影响 | 剪切受阻 | 无影响 | 无影响 |
在不同反应缓冲液中的活性
| 反应缓冲液 | 相对活性 |
|---|---|
| CutFlex Buffer | 100% |
| Thermo Scientific FastDigest Buffer | <12.5% |
| NEB rCutSmart™ Buffer | 100% |
| Takara QuickCut™ Buffer | <25% |
注：活性数据来自瀚海限制酶标准反应体系下的检测。
