Exonuclease I（E.coli）是单链特异性核酸外切酶，沿 3′-5′方向降解单链 DNA，释放 5′-脱氧核糖核苷酸。Exo I 对单链有很强的特异性，不会降解双链 DNA 和 RNA。此外，也无法降解由磷酰基团或乙酰基团封闭了 3′-OH 末端的 DNA 单链。本产品是把 Exo I 基因（E.coli）在大肠杆菌中进行重组表达后，经多次纯化分离而得到的。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 核酸外切酶 I | HSM060131-01 | 1500 U |
| HSM060131-02 | 7500 U |
产品组分
| 组分 | HSM060131-01 | HSM060131-02 |
| Exonuclease I（20 U/μL） | 75 μL | 375 μL |
| 10× Exo I Buffer | 1 mL | 5×1 mL |
活性定义
1 活性单位（U）是指以单链 DNA 为底物，37℃、1× Exo I 缓冲液条件下，30 min 内释放 10 nmol 酸溶性核苷酸所需的酶量。
产品应用
1. 从 PCR 产物中去除引物和寡核苷酸：Exo I 可去除 PCR 反应中未用完的引物以及扩增产生的多余的单链 DNA。
2. 去除核酸混合物中的 ssDNA：Exo I 可特异性地消化反应液中的 ssDNA，而不会消化 dsDNA 和 RNA。
3. ssDNA 检测：Exo I 可用于检测存在游离 3′羟基的 ssDNA。
质量控制
蛋白纯度：蛋白纯度经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性：37℃下，在 20 μL 反应体系中将 100 U Exonuclease I 与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性：37℃下，在 20 μL 反应体系中将 100 U Exonuclease I 与 15 ng 双链 DNA 片段共同温育 16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
RNase 活性：37℃下，在 10 μL 反应体系中将 100 U Exonuclease I 与 500 ng RNA 共同温育 1 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，超过 90%的 RNA 保持完整。
宿主 DNA 残留：采用中国药典 2020 版四部通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法定量 PCR 法，本品中大肠杆菌宿主细胞 DNA 残留量低于 1 拷贝/20 U。
使用方法
1. 推荐的反应体系
1）PCR 反应产物中去除引物或其他单链残留：
| 组分 | 体积 |
| PCR mixture | 5 μL |
| Exonuclease I | 0.5 μL（10 U） |
注：配合虾碱性磷酸酶（SAP）用来去除残存的单核苷酸（dNTPs），之后不需要对 PCR 产物进行纯化，即可以进行测序反应。
2）单链 DNA 去除
| 组分 | 体积 |
| DNA mixturea | 2 μg |
| Exonuclease I | 1 μL |
| 10× Exo I Buffer | 10 μL |
| ddH2O | Up to 20 μL |
a：DNA mixture 中的单链 DNA 不超过 1 μg。
2. 推荐的反应条件
37℃温育 15~30 min。
3. 失活
80℃温育 20 min。
注意事项
1. Exo I 可兼容绝大多数 PCR 体系，可直接在 PCR 产物中添加。纯化后的 PCR 产物可直接用于测序，但不推荐直接用于克隆。
2. Exo I 用于单独去除 ssDNA 的实验，推荐搭配 10× Exo I Buffer 使用。
3. Exo I 不能切割双链 DNA，因此含有二级结构的单链 DNA 需要变性后才能完全消化。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。
