核酸外切酶 III 是一种核酸外切酶，该酶作用于双链 DNA，从 3′-OH 末端方向逐步切去单核苷酸。
该酶最适底物是平末端或 5′末端突出的 DNA，但也可以作用于双链 DNA 切刻位点产生单链缺口。由于对单链 DNA 无活性，因此该酶难以切割 3′突出末端。3′到 5′外切酶活性对底物的消化程度随 3′突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端难以被切割。这种特性可以用于生产特定方向的单链 DNA，将线性化 DNA 设计成为一端为不切割末端（3′突出端），另一端则设计为易切割末端（平端或 5′突出端），此时核酸外切酶 III 将仅消化一条链。
核酸外切酶 III 也有 RNase H、3′-磷酸酶和脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 核酸外切酶 III | HSM060041 | 5000 U |
产品组分
| 组分 | 规格 |
| 核酸外切酶 III（100 U/μL） | 50 μL |
| 10× Exo III Buffer | 500 μL |
应用方向
① 单向嵌套缺失
② 定点突变
③ 单链特异性探针的制备
④ 双脱氧测序用单链底物的制备
酶活定义
一个酶活单位（U）的定义是以双链 DNA 为底物在 37℃下孵育 30 min，生成 1 nmol 的酸可溶性物所需的酶量。
质量控制
核酸内切酶污染：核酸外切酶 III 与超螺旋 DNA 共同孵育后进行琼脂糖凝胶电泳，超螺旋条带无显著降解。
使用方法
① 于冰上配制如下反应体系：
| 试剂 | 使用量 |
| DNA | ~5 μg |
| 10× Exo III Buffer | 5 μL（1×） |
| 核酸外切酶 III | 0.5 μL |
| Nuclease-Free Water | To 50 μL |
② 37℃孵育 30 min；
③ 加入终浓度为 11 mM 的 EDTA 以停止反应；
④ 热失活条件为 70℃孵育 30 min；
⑤ 建议采用以下步骤回收处理后的样本：
a. 使用 PCR 柱清洁；
b. 进行琼脂糖凝胶电泳，然后胶回收 DNA；
c. 进行苯酚/氯仿萃取，后使用乙醇沉淀。
