HHRevScript 逆转录酶 III是通过基因修饰和重组技术获得的第三代M-MLV逆转录酶。该酶相对于野生型M-MLV逆转录酶去除了RNase H活性，并大幅提高了热稳定性（最适反应温度为50℃），从而大大提高了合成第一链cDNA时的特异性和长度（最长可达12 kb），增强了对RNA复杂二级结构的耐受性。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
| HHRevScript 逆转录酶 III | HSM080061 | 10000 U |
产品组分
| 组分 | 规格 |
| HHRevScript 逆转录酶 III(200 U/μL) | HSM080061A 50 μL |
| 5× HHRevScript Buffer | HSM080061B 500 μL |
| 0.1 M DTT | HSM080061C 100 μL |
活性定义
37℃条件下，以 Poly(A)-Oligo(dT)为模板/引物，在 10 min 内，掺入 1 nmol 的[3H]dTTP 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。
质量控制
宿主原性 DNA 检测：无宿主 DNA 污染。
核酸内切酶残留检测：将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。
核酸外切酶残留检测：将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。
使用方法
1. 第一链 cDNA 合成步骤
(1) 于冰上配制如下反应体系：
| 试剂 | 添加量 |
| 引物 Oligo(dT)20 或随机引物 或基因特异性引物 | X μL 终浓度 2.5 μM 终浓度 2.5 ng/μL 终浓度 0.25 μM |
| 模板 RNAa | 50 ng~1 μg/20 μL |
| 5× HHRevScript Buffer | 4 μL |
| 0.1 M DTT | 1 μL |
| HHRevScript 逆转录酶 II（200 U/μL） | 1 μL |
| dNTP Mix（10 mM Each） | 1 μL |
| （可选）RNase Inhibitor（40 U/μL） | 1 μL |
| Nuclease-Free Water | Up to 20 μL |
a：推荐使用试剂盒提取的已去除基因组 DNA 污染的高质量 RNA 作为模板。
(2) 轻柔吸打混匀后，瞬离；
(3) 若使用 Oligo(dT)20 或基因特异性引物，50℃温育 30 min；若使用随机引物，先 25℃温育 5 min，之后 50℃温育 30 min；
注：若目的 cDNA 小于 3 kb，温育时间可缩短为 15 min。
(4) 反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；
(5) 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA 溶液置于-25~-15℃可保存半年；置于-85~-65℃可长期储存。
注意事项
本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
