Hi Trans mRNA 转染试剂，其原理是信使核糖核酸（mRNA）在细胞质中启动蛋白质翻译，不需要进入细胞核，可实现比 DNA 转染更快的蛋白表达，且避免基因整合风险。
Hi Trans mRNA 转染试剂是一种结合了阳离子聚合物和脂质体优点的转染试剂，协同促进转染复合进入细胞，随后在胞质中释放，能够在多种细胞类型中实现高效、低毒的转染效果。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
|---|---|---|
| Hi Trans mRNA 转染试剂 | HSC020141-01 | 300 μL |
| Hi Trans mRNA 转染试剂 | HSC020141-02 | 1 mL |
运输及保存方法
冰袋运输。2~8℃保存，有效期 6 个月；-30~-10℃保存，有效期 12 个月。注：避免反复冻融。
使用说明
（本说明以 24 孔板为例，其他培养皿中转染请参考表 1 和表 2）
1.接种细胞
对于贴壁细胞：转染前一天，将细胞按照每孔 1-2x105个细胞的量进行铺板，使其在转染时密度为 60-80%为佳。对于悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，用 PBS 清洗细胞 1-2 次，用 250 μL OptiMEM I 减血清培养基(无血清)重悬细胞，在 24 孔板中进行细胞铺板，细胞密度为 60-80%。
2.准备转染试剂-mRNA 复合物
(1) 对于每孔细胞，将 0.5 μg 待转染 mRNA 加入到 1.5 mL 离心管中，加入 2 μL 转染试剂与 mRNA 混合，室温孵育 3 min。
(2) 往上述混合物中加入 100 μL Opti-MEM I 减血清培养基(无血清)，轻轻混匀，在室温下静置 30 min，形成转染试剂-核酸复合物。
(3) 30 min 后，往上述复合物中加入 250 μL Opti-MEM I 减血清培养基(无血清)，轻轻混匀。
3.转染细胞
(1) 细胞用 PBS 清洗 1-2 次，将上述 350 µL 转染试剂-mRNA 复合物加入每孔细胞。
(2) 在 37℃，5% CO2 培养箱培养 12 h，无需更换新的培养液，之后即可检测转染效果。若需更长时间转染，可在转染 12 h 后补充 150 μL 完全培养基(含血清)，总体积达到 500 μL，即达到常规的培养皿使用培养液的量，12-36 h 后再进行检测。
注：筛选稳定转染细胞株，转染细胞 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍以上），在 37℃，5% CO2 培养箱中孵育 24 h，加入筛选培养基。在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下，约 1～2 周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
注意事项
• 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
• 为了您的安全健康，请穿实验服并佩戴手套操作。
• mRNA 质量：请务必使用高纯度、无菌、无污染、无内毒素的优质 mRNA。可以通过对 mRNA 进行加帽(相比于 Cap0 结构，带有 Cap1 结构的 mRNA 对于哺乳动物系统更适合)，使用 N1-甲基-假尿苷修饰和添加 poly(A)尾，以增强 mRNA 的稳定性和寿命。
• 整个实验过程使用无 RNA 酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。
• 细胞条件：细胞状态会极大影响转染效率，待转染细胞应处于良好生长状态，建议使用生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。
• 细胞培养液要求：Hi Trans mRNA 转染试剂转染实验要求采用无血清转染体系(推荐使用 Opti-MEM 减血清培养基)，因为血清会影响复合物的形成及 mRNA 转染效率。
• 由于某些特殊培养基中的成分可能会抑制阳离子聚合物介导的转染，因此建议测试这些培养基与本产品的相容性，以确保最佳转染效果。
• 试剂用量的优化：RNA 浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，初次使用应优化 mRNA 浓度和转染试剂用量以得到最大的转染效率。通常情况下，24 孔板的推荐 mRNA 用量为 0.2-1 μg，转染试剂推荐用量为 2-4 μL。建议初次使用时，可在推荐范围内进行不同用量的预实验，以优化转染效果。
表1：不同培养体积对应的待转 mRNA、Hi Trans、稀释液用量
| 培养器皿 | 培养液体积（mL） | RNA量（μg） | 转染试剂（μg） | Opti-MEMI 培养基a (μL) | Opti-MEMI 培养基b (μL) |
|---|---|---|---|---|---|
| 48孔板 | 0.1 | 0.1 | 0.4 | 20 | 50 |
| 24孔板 | 0.5 | 0.5 | 2 | 100 | 250 |
| 12孔板 | 1 | 1 | 4 | 200 | 500 |
| 6孔板 | 2 | 2 | 8 | 400 | 1000 |
| 60 mm培养皿 | 4 | 4 | 16 | 800 | 2000 |
| 100 mm培养皿 | 10 | 10 | 40 | 2000 | 5000 |
注：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。a: 稀释转染试剂-mRNA 复合物所需培养基的量；b: 加入转染试剂-mRNA 复合物的培养基的量。
