HiFect mRNA Transfection Reagent 是专门用于 mRNA 高效转染的转染试剂。HiFect mRNA 具有非常卓越的转染性能，可高效转染绝大多数贴壁细胞和部分悬浮细胞，转染效率在贴壁细胞中可高达 90%以上（AAV293 细胞等）。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，HiFect mRNA 转染试剂采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后细胞死亡率只有 5%左右。HiFect mRNA 使用也非常方便，先将转染试剂与 mRNA 混合，再将转染试剂-mRNA 复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| HiFect mRNA 转染试剂 | HSC020171-01 | 0.1 mL |
| HSC020171-02 | 0.5 mL | |
| HSC020171-03 | 1 mL | |
| HSC020171-04 | 1.5 mL |
产品组分
| 组分 | HSC020171-01 | HSC020171-02 | HSC020171-03 | HSC020171-04 |
|---|---|---|---|---|
| HiFect | 0.1 mL | 0.5 mL | 1 mL | 1.5 mL |
| Trans buffer | 4 mL | 20 mL | 40 mL | 60 mL |
运输及保存方法
-25~-15℃避光保存，Trans buffer 可保存于 2~8℃，有效期一年，使用前请先将本品轻轻混匀。
适用细胞系
293T，A549，B16F10，HEK293，HeLa，Hepa 1-6，HepG2，BHK-21，BNL.CL2，BRL-3A，C2C12，C6，Clone 9，COS-1，COS-7，Daoy，DBTRG-05MG，DI-TNC1，DU145，HLF-a，Huh-7，K562，KB，KLN205，NCaP-FGC，MCF-7，MEL，Neuro-2a，NIH3T3，OVCAR3，PC3，PC-12，4T1，ACNN，BJ，BT-549，CACO-2，H460，H9C2，HCT116，Hep-3B，Hs578T，HT-1080，MCF10A，MDA-MB-231，NCI-H23，PANC-1，RAW264.7，Saos-2，RD，SK-MEL-28，SK-OV-3，SW480，U2OS，Vero，293F，BE(2)C，CHO-S，CV-1，HT-29，Jurkat，RKO，SK-BR3 等。
产品特点
1. 卓越的细胞转染性能：可高效转染绝大多数贴壁细胞和部分悬浮细胞，转染效率在贴壁细胞中可高达 90%以上；
2. 极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率只有 5%左右，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
3. 抗血清干扰，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。
操作说明（以 24 孔板转染为例）
一、细胞接种
1. 转染前一天，根据细胞密度优化结果对细胞进行转接，24 孔板一般接种细胞数为 1.5x105左右，培养基体积为 0.5 mL，培养过夜；
2. 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
二、HiFect/mRNA 转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染)
1. 在 1.5 mL 无菌离心管中加入 50 μL Trans buffer，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置 5 分钟。
2. 在 1.5 mL 无菌离心管中加入 50 μL Trans buffer，再加入适量的 mRNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置 5 分钟。
3. 将 mRNA-Trans buffer 混合物滴加至 HiFect-Trans buffer 混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置 15 分钟后，立即转染。
注意：
HiFect-Trans buffer 混合物和 mRNA-Trans buffer 混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒；
2 离心管最好使用聚丙烯离心管。
三、转染
1. 将步骤二制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
2. 培养 6 小时后即可观察标记荧光，表达蛋白检测时间一般为 24~60 小时，最佳荧光观察时间或蛋白检测时间需实验确定。
3. HiFect 在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入 HiFect/mRNA 复合物 12~24 小时后进行。
附表.不同培养体系推荐初始转染条件
| 培养皿 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 10cm皿 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 表面积（cm²） | 0.35 | 1.0 | 1.9 | 3.8 | 9.6 | 59 |
| Trans buffer（μL） | 25 | 50 | 100 | 200 | 300 | 1000 |
| HiFect（μL） | 0.6 | 1.2 | 2.5 | 5.0 | 10 | 50 |
| 1 μg/μL mRNA量（μL） | 0.25 | 0.5 | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 20 |
| 完全培养基（mL） | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 |
注意事项
1. 转染时细胞生长状态应保持良好，不要有支原体污染。
2. 首次转染，建议选择 24 孔板进行细胞密度优化实验，如选择 3 个孔，每孔分别接种 1.0x105、1.5x105、2.0x105个细胞，选择转染效果最优的细胞接种数进行正式实验。
3. 应避免转染复合物制备体系中存在血清，因血清会干扰 HiFect 与 mRNA 形成复合物，转染所用培养基中尽量不要使用抗生素。
4. 转染试剂使用前请务必用移液器轻轻吹打混匀，使用后，请立即旋紧 HiFect 管盖，尽快放于-20℃，避光保存。
