HiFi Taq DNA Ligase是一种突变型的Taq DNA连接酶，较野生型具有较高的连接效率及高保真性，同时维持了野生型的基本功能，是一种耐高温连接酶，在37~75℃范围内均具有活性。Taq DNA连接酶以NAD+为辅酶因子催化与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5′-磷酸和3′-羟基之间形成磷酸二酯键，只对DNA切刻具有显著的活性。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 高保真Taq DNA连接酶 | HSM060071 | 50 rxn |
产品组分
| 组分 | 规格 |
| HiFi Taq DNA Ligase | 50 μL |
| 10× HiFi Taq DNA Ligase Buffer | 500 μL |
质量控制
非特异性内切酶活性检测：将1 μL的本品与超螺旋质粒DNA在37℃温育4 h，通过DNA电泳检测质粒无变化。
DNase残留检测：将1 μL本品与双链DNA底物在37℃温育16 h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
RNase残留检测：将1 μL的本品与500 ng RNA在37℃温育1 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测超过90%的RNA仍保持完整。
宿主DNA残留检测：本品中大肠杆菌宿主细胞DNA残留量低于10拷贝/μL。
推荐反应体系
| 组分 | 规格 |
| DNA | Up to 1 μg |
| HiFi Taq DNA Ligase | 1 μL |
| 10× HiFi Taq DNA Ligase Buffer | 5 μL |
| ddH2O | Up to 50 μL |
推荐反应条件
45~65℃反应15 min。
注意事项
1. 反应条件：Taq高保真DNA连接酶的反应温度范围为37~75℃。对于某组给定的探针，最佳连接温育温度通常与探针退火区域Tm值相差5℃以内。同时在实际应用中，需要根据经验实现活性和保真度的最佳平衡。
2. 对于经典的LDR检测，反应时间通常在10~60 min之间，其中15 min反应时间适用于多数应用。对于需要进行变性/退火/连接循环的检测，建议在95℃条件下变性30 s~2 min，然后以探针组优化后的连接温度退火/连接1~5 min。
3. 10× HiFi Taq DNA Ligase Buffer中含有NAD+作为辅因子，将其分装后储存在-80℃条件下，以便进一步延长NAD+辅因子的半衰期。反应Buffer从低温到室温解冻后，溶液中可能出现白色沉淀，可以用移液器吹打20~30次或者涡旋震荡溶解沉淀后再使用。若反应Buffer变棕色可以继续使用。
4. 在通过凝胶电泳观察连接反应时，建议使用蛋白酶K进行产物处理后再进行电泳，以避免出现凝胶迁移。
