Nb.BbvCI 是一种切刻内切酶，仅切割 dsDNA 底物的一条链；在 dsDNA 底物上产生切口，而不切开 dsDNA。Nb.BbvCI 常用于核酸等温扩增（如 SDA、RCA），由 Nb.BbvCI 产生 DNA 缺口，触发聚合酶的链置换反应，重复切割、置换、延伸过程从而实现核酸指数扩增。Nb.BbvCI 在通用的 CutFlex 或 CutFlex Color Buffer 中都具有优良的活性。CutFlex Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutFlex Color Buffer 的红色染料与 2500bp 双链 DNA 片段在 1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与 10bp 双链 DNA 片段在 1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
|---|---|---|
| 切刻内切酶 Nb.BbvCI | HSM053001 | 300 U |
产品组分
| 组分 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| Nb.BbvCI (10 U/μL) | HSM053001A | 30 μL |
| 10×CutFlex Buffer | HSM051001 | 1 mL |
| 10×CutFlex Color Buffer | HSM051011 | 1 mL |
运输及保存方法
-25~-15℃运输与保存，有效期 2 年。
建议反应条件
1. 1× CutFlex Buffer；
2. 37℃温育；
3. 参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。
失活条件
80℃温育 20 min。
活性定义
1 活性单位（U）是指在 50 μL 反应体系中，37℃ 1 h 内可以完全将 1 μg 的超螺旋 p615 DNA 转化成开环形式所需的酶量。
质量控制
功能活性检测：37℃下，在 20 μL 通用 CutFlex 反应体系中，10 U Nb.BbvCI 能够在 15 min 内将 1 μg p615 DNA 转化成开环形式。
超长时间温育检测：将 10 U Nb.BbvCI 与超螺旋 p615 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过琼脂糖凝胶电泳检测开环 DNA 无变化。
使用方法
一、DNA 酶切流程
1. 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 试剂 | 用量 |
|---|---|
| ddH2O | Up to 50 μL |
| 10×CutFlex Buffer 或 10×CutFlex Color Buffer | 5 μL |
| 底物 DNAa | 1 μg |
| Nb.BbvCI (10 U/μL) | 1 μL |
| Total | 50 μL |
a:DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响 Nb.BbvCI 酶活性。
2. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
3. 37℃温育 15 min~3 h；
4. 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
二、注意事项
1. 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；
2. 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA 或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。
不同 DNA 中的酶切位点数量
| DNA | 酶切位点数量 |
|---|---|
| λDNA | 7 |
| ΦX174 | 3 |
| pBR322 | 0 |
| pUC57 | 0 |
| pUC18/19 | 0 |
| SV40 | 0 |
| M13mp18/19 | 2 |
| Adeno2 | 9 |
甲基化修饰影响
| Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
|---|---|---|---|---|
| 无影响 | 无影响 | 无影响 | 无影响 | 剪切受阻 |
