Nt.BstNBI 是一种切刻内切酶，仅切割 dsDNA 底物的一条链；在 dsDNA 底物上产生切口，而不切开 dsDNA。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
|---|---|---|
| 切刻内切酶 Nt.BstNBI | HSM050891 | 2000 U |
产品组分
| 组分 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| Nt.BstNBI (10 U/μL) | HSM050891A | 200 μL |
| 10× Cut Buffer C | HSM051031 | 2×1 mL |
活性定义
1 活性单位(U)是指在 50μL 反应体系中，55℃ 1h 内可以完全将 1µg 的超螺旋 pUC19 DNA 转化成开环形式所需的酶量。
运输及保存方法
-25~-15℃运输与保存。
建议反应条件
1. 1×Cut Buffer C；
2. 55℃温育；
3. 参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。
4. 本品在 37℃进行酶切反应时，有 100%的活性。
5. 本品在 CutFlex 反应缓冲液中，有 25%的活性。
失活条件
80℃温育 20min。
质量控制
超长时间温育检测
将 10U Nt.BstNBI 与超螺旋 pUC19 DNA 底物在 55℃温育 16h，通过琼脂糖凝胶电泳检测开环 DNA 无变化。
RNase 残留检测
将 10U Nt.BstNBI 与 500ng RNA 在 37℃温育 1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测超过 90%的 RNA 仍保持完整。
使用方法
1. DNA 酶切流程
1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 组分 | 规格 |
|---|---|
| ddH2O | Up to 50 μL |
| 10×Cut Buffer C | 5 μL |
| 底物 DNAa | 1 μg |
| Nt.BstNBI (10 U/μL) | 1 μL |
| Total | 50 μL |
a:DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响 Nt.BstNBI 酶活性。
2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
3) 55℃温育 30min~1h；
4) 80℃温育 20min 即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
2. 注意事项
1) 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；
2) 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA 或乙醇等)相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。
不同 DNA 中的酶切位点数量
| λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 61 | 10 | 4 | 3 | 4 | 5 | 8 | 40 |
甲基化修饰影响
| Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
|---|---|---|---|---|
| 无影响 | 无影响 | 无影响 | 无影响 | 无影响 |
