2×常规 PCR 预混液是使用 Taq DNA Polymerase 配制的 PCR 反应预混液，已包含反应缓冲液、dNTP 等组分，方便快捷，能减少 PCR 操作过程中的污染。使用时只需取适量常规 PCR 预混液（2×），加入模板和引物，并加入 ddH2O 补足体积，使反应体系浓度为 1×即可进行 PCR 反应。
该 Mix 最长可扩增 5 kb DNA 片段，具有良好的扩增特异性和模板兼容性，PCR 产物 3′端带突出 A 碱基，纯化后可直接用于 T/A 克隆。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| 2×常规PCR预混液 | HSM020111 | 5×1 mL |
质量控制
核酸内切酶残留检测：将 25 μL 2×常规 PCR 预混液与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 配制成 50 μL 反应体系，在 37℃下共同温育 4h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测。
非特异性核酸酶活性检测：将 2×常规 PCR 预混液与 15 ng 双链 DNA 片段配制成 50 μL 反应体系，在 37℃下温育 16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 底物无变化。
反应体系和条件
反应液按下表配置：
| 组分 | 体积 |
|---|---|
| 2×常规 PCR 预混液 | 25 μL |
| 正向引物（10 μM）a | 1~2 μL（0.2~0.4 μM） |
| 反向引物（10 μM）a | 1~2 μL（0.2~0.4 μM） |
| 模板 DNAb | x μL |
| ddH2O | To 50 μL |
a. 引物推荐终浓度为 0.2~0.4 μM，效果不佳时可以在 0.1~1 μM 浓度范围内进行调整；
b. 不同模板最佳反应浓度有所不同，以 50 μL 体系为例：模板为基因组 DNA 时，一般推荐的使用量为 10~400 ng；当模板为质粒或病毒 DNA 时，一般推荐的使用量为 10pg~20ng。
扩增程序
三步法 PCR 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环 |
|---|---|---|---|
| 预变性a | 94℃ | 3~5min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30s | 30~35 |
| 退火b | 55~65℃ | 30s | |
| 延伸c | 72℃ | 30s/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min | 1 |
二步法 PCR 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环 |
|---|---|---|---|
| 预变性a | 94℃ | 3~5min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30s | 30~35 |
| 退火和延伸b | 60~65℃ | 30s/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min | 1 |
b. 关于延伸速率，当目的片段长度不超过 2kb 时，推荐使用 30 s/kb；当目的片段长度大于 2 kb 时，推荐使用 60s/kb。
注:如果使用酵母菌液作为 PCR 扩增模板，建议目的片段长度不超过 2.5 kb，若超出 2.5kb, 建议将酵母菌液预先进行破壁处理。
