2x RT-qPCR SYBR Master Mix 是使用 SYBR GreenⅠ嵌合荧光法进行实时定量 PCR 反应的试剂盒。使用基因特异性引物，反转录和 qPCR 在一管内进行，无需反复开盖和移液操作，降低了污染风险。本产品选择升级版热稳定逆转录酶和热启动 Taq 聚合酶，具有更强的特异性，更高的灵敏度和更好的扩增性能。配方中还添加有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和特异性促进因子，非常适配于对特异性，灵敏度高要求的 qPCR 扩增。
本产品已提前掺入 ROX 参比染料，适用于市面上绝大多数荧光定量 PCR 仪，操作过程中无需额外调整 ROX 浓度，仅需要在扩增体系中加入模板和引物即可进行扩增。操作简单，能大大提高实验效率。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| 2x RT-qPCR SYBR Master Mix | HMD3920-01 | 100 rxn |
| HMD3920-02 | 500 rxn |
产品组分
| 组分 | HMD3920-01 | HMD3920-02 |
| 2x RT-qPCR SYBR Buffer | 1×1.25 mL | 5×1.25 mL |
| 25x Enzyme Mix | 1×100 μL | 1×500 μL |
注意事项
•操作过程中请使用 RNase free 耗材和专用的移液枪和带滤芯的枪头，以免造成污染
•吸取反应液时应尽量避免气泡，如果操作不慎引起气泡，需再次离心方可使用，进行上机时请检查 PCR 管管盖是否盖紧以避免液体蒸发导致的结果不准确及扩增产物污染
•试剂使用前请务必充分融化混匀，不同批号试剂不宜混合使用
•由于本产品检测灵敏度极高，易被气溶胶污染，推荐在超净台内进行反应体系的配置
反应体系
| 组分 | 体积 |
| 2x RT-qPCR SYBR Buffer | 12.5 μL |
| 25x Enzyme Mix | 1 μL |
| Primer 1（10 μM） | 0.5 μL |
| Primer 2（10 μM） | 0.5 μL |
| 模板 RNA | X μL |
| 无核酸酶水 | Up to 25 μL |
a: 引物浓度通常为 0.2 μM，当扩增性能较差时可根据实际情况自行优化。
b: 推荐将模板稀释后加入反应体系中，这样可以有效提高实验的重复性，若模板类型为未稀释的提取 RNA 原液，使用体积不应超过 qPCR 反应总体积的 1/10。
反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 反转录 | 50℃ | 6 min | 1 Cycle |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 Cycle |
| 扩增反应 | 95℃ | 15 s | 40 Cycles |
| 60℃ | 30 s | ||
| 熔解曲线 | 仪器默认设置 | 1 Cycle |
c: 逆转录温度根据实验需求在 50-55℃选择，建议的退火温度为 60℃，可根据设计引物实际 Tm 值进行调整，一般设置成低于引物 Tm 值 3-5℃即可。
