二代温启动逆转录酶是通过基因修饰和重组技术克隆表达的RNase H活性缺失型莫洛尼氏鼠白血病病毒（Moloney Murine Leukemia Virus, M-MLV）逆转录酶，它利用核酸适配体技术，通过共价键作用结合到M-MLV上，能抑制M-MLV在31℃以下的活性，从而提高产物特异性。经过基因工程改造，本酶的最适反应温度提升至50℃，延伸能力更强，可用于较长的cDNA合成。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
| 二代温启动逆转录酶 | HSM080031 | 10000 U |
产品组分
| 组分 | 规格 |
| 二代温启动逆转录酶(200 U/μL) | HSM080031A 50 μL |
| 5× M-MLV First Strand Buffer | HSM080031B 1 mL |
| 0.1 M DTT | HSM080031C 100 μL |
活性定义
37℃条件下，以 Poly(A)-Oligo(dT)为模板/引物，在 10 min 内，掺入 1 nmol 的[3H]dTTP 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。
质量控制
宿主原性 DNA 检测：无宿主 DNA 污染。
核酸内切酶残留检测：将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。
核酸外切酶残留检测：将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。
使用方法
1. 在 EP 管中配制如下反应体系：
| 组分 | 使用量 |
| 模板 RNAa | 50 ng~1 μg/20 μL |
| 引物 Oligo(dT)20 或随机引物 或基因特异性引物 | X μL 终浓度 2.5 μM 终浓度 2.5 ng/μL 终浓度 0.25 μM |
| dNTP Mix（10 mM each） | 1 μL |
| ddH2O | Up to 13 μL |
a. 推荐使用试剂盒提取的已去除基因组 DNA 污染的高质量 RNA 作为模板。
2. 将以上混合液在 65℃温育 5 min，迅速取出置于冰上冷却 1 min；
3. 向反应混合液中继续加入：
| 组分 | 体积 |
| 5× M-MLV First Strand Buffer | 4 μL |
| 0.1 M DTT | 1 μL |
| 二代温启动逆转录酶（200 U/μL） | 1 μL |
| （可选）RNase Inhibitor（40 U/μL） | 1 μL |
4. 轻柔吸打混匀后，瞬离；
5. 若使用 Oligo(dT)20 或基因特异性引物，50℃孵育 30 min；若使用随机引物，先 25℃孵育 5 min，之后 50℃孵育 30 min；
6. 反应结束后，85℃孵育 5 min 以终止反应；
7. 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA 溶液置于-20℃可保存半年；置于-80℃可长期储存。
注意事项
本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
