RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液，是一种经典的动物组织/细胞快速裂解液，通过组合离子型去垢剂和非离子去污剂对组织细胞的消化作用使组织细胞崩解释放出蛋白质，对细胞膜、胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用。适用于 PAGE、Western Blotting 和免疫沉淀(IP)的研究。
本产品不含 PMSF 组分。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| RIPA裂解液（强） | HSC070011 | 100mL |
运输与保存方法
常温运输。2~8℃保存，有效期 12 个月。
使用方法
1. 贴壁细胞
（1）取适量裂解液，加入蛋白酶抑制剂混合物(100×，不含 EDTA)或 PMSF(终浓度为 1mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
（2）去除细胞培养液，用预冷的 PBS 洗涤两次。按照 6 孔板每孔加入 150-200μl 的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果细胞密度过高可增加裂解液的量至 250-300μL。【注】：裂解液过少会使细胞裂解不充分，影响蛋白提取的质量。
（3）用枪吹打数下，冰上放置 10min，期间每隔 2min 用枪吹打数下。
（4）转移细胞裂解液于 1.5mL EP 管中。
（5）12,000g，4℃离心 5min。
（6）收集上清。
悬浮细胞
（1）取适量裂解液，加入蛋白酶抑制剂混合物(100×，不含 EDTA)或 PMSF(终浓度为 1mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
（2）收集细胞 0.5~2×107 于 1.5mL 离心管中，1mL 预冷的 PBS 洗涤两次，1,000×g 离心 3min，弃上清，重复三次。
（3）按照 6 孔板每孔加入 150-200μL 的裂解液的比例均匀加入裂解液，如果细胞密度过高可增加裂解液的量至 250-300μL。【注】：裂解液过少会使细胞裂解不充分，影响蛋白提取的质量。
（4）用枪吹打数下并剧烈震荡，冰上放置 10min，期间每隔 2min 震荡一次。
（5）12,000g，4℃离心 5min。
（6）收集上清。
2. 组织样品
（1）把组织剪成细小的碎片。
（2）取适量裂解液，加入蛋白酶抑制剂混合物(100×，不含 EDTA)或 PMSF(终浓度为 1mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
（3）按照每 100mg 组织加入 1mL 裂解液的比例加入裂解液（如裂解不充分可适当增加裂解液，如果需要增加蛋白浓度可适当减少使用的裂解液体积）。
（4）用匀浆器匀浆，直至充分裂解（为防止蛋白降解请于冰上操作）。
（5）12,000g，4℃离心 5min。
（6）收集上清。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 如需检测磷酸化蛋白，则需要额外添加磷酸酶抑制剂 II cocktail（50×）。
3. RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
4. RIPA（强）裂解液含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定蛋白。
5. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
6. 通常 6 孔板每孔细胞加入 150μL 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200μL 或 250μL。
表2：RIPA裂解液的使用量
| 样品来源 | 培养容器 | 收获细胞数 | RIPA用量/μL | 可制备样品数 |
|---|---|---|---|---|
| 细胞 | 6孔板 | 2.5×106 | 150-250 | 400~600 |
| 60mm培养板 | 5.2×106 | 300-500 | 200~300 | |
| 90mm培养板 | 12.2×106 | 500-1000 | 100~200 | |
| 25cm2培养瓶 | 5×106 | 300-500 | 200~300 | |
| 75cm2培养瓶 | 2×107 | 1000-2000 | 50~100 | |
| 组织 | 20mg组织块 | 2.5×106 | 150-250 | 400~600 |
