MazF 是 E.coli 毒素-抗毒素系统中的毒素蛋白，特异性切断单链 RNA 中 ACA 序列 5'末端的核酸内切酶，不能切断双链 RNA、双链 DNA 及单链 DNA。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
|---|---|---|
| RNA 内切酶 MazF | HSM050901 | 1000 U |
产品组分
| 组分 | 规格 |
|---|---|
| MazF (20 U/μL) | 50 μL |
| 5×MazF Buffer | 1 mL |
活性定义
1 活性单位(U)是指在 37℃温度和 pH7.5 条件下，将 1pmol 的标准底物(ROX-5'-GATAUACATATCT-eclipse；下划线部分是 RNA 序列)在 10min 内完全分解的酶量。
运输及保存方法
-25~-15℃运输与保存。
适用范围
1．高分辨率 m6A 甲基化分析；
2．mRNA 药物序列分析。
质量控制
蛋白纯度
经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
RNase 活性
将 20U MazF 与 40ng ssRNA 在 37℃温育 1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，ssRNA 片段无变化。
DNase 活性
将 20U MazF 与 15ng 双链 DNA 在 37℃温育 16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，DNA 片段无变化。
使用方法
1．推荐体系
1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 组分 | 体积 |
|---|---|
| ssRNA (1 pmol/μL) | 0.5~1 μL |
| RNase-free water | 2.5 μL |
| 5×MazF Buffer | 1 μL |
| MazF (20 U/μL) | 1 μL |
| Total | 5 μL |
2) ssRNA 在 37℃中保温 15min 被完全切断。
2．注意事项
1) MazF 特异性切断含 ACA 序列的 ssRNA，但是也会受 AC 位点两侧序列的影响可能切断 AC 位点；
2) MazF 不能切断 dsRNA。因此，由于 RNA 二级结构的影响，MazF 不能切断所有的 ACA 位点序列；
3) 在反应液中添加盐，特别是 Mg2+等二价阳离子时，MazF 的活性会受到抑制。DTT 不影响反应液中的酶活性；
4) MazF 切断的片段不能使用 RNA Ligase 直接进行连接反应，因为片段的两个末端分别是 2', 3'-cyclic phosphate 和 5'-OH。
