RTL 逆转录酶 2.0 是一种依赖 RNA 模板的 DNA 聚合酶，缺少 3' → 5' 的核酸外切酶活性， 具有 RNase H 活性。该酶可利用 RNA 作为模板 ，合成一条互补的 DNA 链，可应用于第一链 cDNA 合成，特别适用于RT-LAMP（环介导等温扩增）。相较于 RTL 逆转录酶 1.0，灵敏度显著提升，热稳定性更强，65℃ 高温反应更稳定。RTL 逆转录酶 2.0（无甘油） 可用于制备冻干制剂、可冻干 RT-LAMP 试剂等。
产品应用
1） cDNA 合成；
2） 与瀚海 Bst DNA聚合酶V2系列产品联合使用，进行 RT-LAMP 等温扩增检测靶标 RNA。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| RTL逆转录酶2.0（无甘油） | HMD5302-01 | 1500 U |
| HMD5302-02 | 15000 U | |
| HMD5302-03 | 150000 U |
产品组分
| 组分 | HMD 5302-01 | HMD 5302-02 | HMD 5302-03 |
| RTL逆转录酶 2.0（无甘油） （15U/μL） | 0.1 mL | 1 mL | 10 mL |
| 10 × HHRTL Buffer | 1.5 mL | 4×1.5 mL | 5×10 mL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 mL | 2×1.5 mL | 3×10 mL |
单位定义
以 Poly(rA)·Oligo(dT)18为模板/引物，在 50℃， 20min 条件下，掺入 1 nmol 的 dTTP 为酸不溶性物质所需要酶量定义为 1 个活性单位 (U)。
质量控制
核酸内切酶残留检测：15U 本酶和 1μg λ -DNA，在 37℃下孵育 16h，琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生明显变化。
核酸外切酶检测：15U 本酶和 1μg λ-HindIII DNA，在 37℃下孵育 4h，琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生明显变化。
核酸切口酶检测：15U 本酶和 1μg pBR322 DNA，在 37℃下反应 4h，琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带缺刻<10%。
RNase 残留检测：15U 本酶和 0.48μg MS2 RNA 在 37℃下孵育 4h，RNA 电泳谱带完整度>90%。
大肠杆菌 DNA 残留检测：15U 本酶中残留的核算经 E.coli gDNA 特异性 TaqManqPCR 检测，E.coli 基因组残留<1copy。
实验流程
逆转录反应体系：
| 组分 | 体积 |
| TemplateRNA* | optional |
| Oligo(dT)18~25（50μM）orRandom Primer Mix（60 μM） | 2μL |
| dNTPMix(10mMeach) | 1μL |
| RNase 抑制剂（40U/μL） | 0.5μL |
| RTL逆转录酶2.0（无甘油）（15U/μ L） | 0.5 μL |
| 10 × HHRTLBuffer | 2 μL |
| Nuclease-free Water | Up to 20 μL |
* 注：Total RNA 推荐使用量 1ng~1μg mRNA 推荐使用量 50ng~100ng
反应程序：
| 温度 25℃ⓐ | 时间 5min |
| 55℃ | 10minⓑ |
| 80℃ | 10min |
ⓐ如使用 Random Primer Mix 增加该孵育步骤； ⓑ可在 10-30 min 间调整。延长逆转录时间有助于获得更长的 cDNA (>5 kb)
RT-LAMP 反应体系
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| TemplateRNA | optional | ≥ 10copies |
| dNTPMix(10mM) | 3.5 μL | 1.4mM |
| FIP/BIPPrimers(25×) | 1 μL | 1.6 μM |
| F3/B3Primers(25×) | 1 μL | 0.2 μM |
| LoopF/LoopBPrimers(25×) | 1 μL | 0.4 μM |
| RNase 抑制剂（40U/μL） | 0.5 μL | 20U/Rxn |
| RTL逆转录酶2.0（无甘油）(15 U/μL) | 0.5 μL | 7.5U |
| Bst DNA聚合酶 (8U/μL) | 1 μL | 8U |
| MgSO4(100mM) | 1.5 μL | 6mM（总共 8mM） |
| 10×HHRTLBuffer (或10×HHBstV2Buffer)* | 2.5 μL | 1 ×（含有 2mM 镁离子) |
| Nuclease-free Water | Up to 25 μL |
体系配制完成，涡旋混合均匀，65℃反应 1h。 * 注：此二者 buffer 互通，组分完全相同
注意事项
1）本产品在-20℃保存会形成白色固体，从 -20℃取出后放冰上 10 分钟左右，融化后震荡混匀即可使用；
2）cDNA 产物可在-20℃或者-80℃保存或立即用于 PCR 反应；
3）防止 RNase 污染，请保持实验区域洁净， 操作时需穿戴干净的手套、口罩。实验所用的离心管、吸头等耗材均需保证 RNase-free。
