SapI 是经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutFlex 或 CutFlex Color Buffer 中都具有优良的活性，能够在 5~15 分钟内完成酶切。CutFlex Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutFlex Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与 10 bp 双链 DNA 片段在 1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
同裂酶：BspQI, LguI, PciSI
注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
|---|---|---|
| SapI | HSM050951 | 50 rxn |
产品组分
| 组分 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| SapI（1rxn/μL） | HSM050951A | 50 μL |
| 10× CutFlex Buffer | HSM051001 | 1 mL |
| 10× CutFlex Color Buffer | HSM051011 | 1 mL |
运输及保存方法
-25~-15℃运输与保存。
建议反应条件
1. 1× CutFlex Buffer；
2. 37℃温育；
3. 参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件
80℃温育 20 min。
质量控制
功能活性检测：37℃下，在 20 μL 通用 CutFlex 反应体系中，1 μL SapI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA。
超长时间温育检测：37℃下，在 20 μL 通用 CutFlex 反应体系中将 1 μL SapI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切-连接-再酶切检测：37℃下，使用 10 倍酶量的 SapI 消化 DNA 底物，回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA 连接酶可以将超过 95% 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开约 95%以上的连接产物。
使用方法
1. DNA 快速酶切流程
1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 组分 | 质粒 DNA | PCR 产物 | 基因组 DNA |
|---|---|---|---|
| ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
| 10× CutFlex Buffer 或 10× CutFlex Color Buffer | 2 μL | 3 μLa | 5 μL |
| 底物 DNA | 2 μL（up to 1 μg） | 10 μL（约 0.2 μg） | 10 μL（5 μg） |
| SapI（1rxn/μL） | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
| Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
a: 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× CutFlex Buffer 加入量可适当减少至 2 μL。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
3) 37℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；
4) 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）；
5) 如果使用 CutFlex Color Buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2. 双酶切或多酶切
1) 每种快速内切酶的用量为 1 μL，并根据需要适当扩大反应体系；
2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；
3) 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
| 组分 | 用量 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 1 μg | 2 μg | 3 μg | 4 μg | 5 μg | |
| 底物 DNA | 1 μg | 2 μg | 3 μg | 4 μg | 5 μg |
| SapI（1rxn/μL） | 1 μL | 2 μL | 3 μL | 4 μL | 5 μL |
| 10× CutFlex Buffer 或 10× CutFlex Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 3 μL | 4 μL | 5 μL |
| Total | 20 μL | 20 μL | 30 μL | 40 μL | 50 μL |
注：如果总反应体系大于 20 μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位点数量
| DNA | 酶切位点数量 |
|---|---|
| λDNA | 10 |
| ΦX174 | 1 |
| pBR322 | 1 |
| pUC57 | 1 |
| pUC18/19 | 1 |
| SV40 | 0 |
| M13mp18/19 | 0 |
| Adeno2 | 7 |
甲基化修饰影响
| Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
|---|---|---|---|---|
| 无影响 | 无影响 | 无影响 | 无影响 | 剪切受阻 |
在不同反应缓冲液中的活性
| CutFlex Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB rCutSmart™ Buffer | Takara QuickCut™ Buffer |
|---|---|---|---|
| 100% | 25% | 100% | 25% |
注：活性数据来自瀚海限制酶标准反应体系下的检测。
