T4 RNA Ligase 1，即 T4 RNA 连接酶 1，是一种依赖 ATP 的可以催化单链 RNA、单链 DNA 或单核苷酸分子间或分子内 5′-P 末端与 3′-OH 末端之间形成磷酸二酯键的酶。可用于 ssRNA 的分子间连接、ssRNA 与 ssDNA 的分子间连接、ssRNA 3′-OH 末端用放射性同位素 5′-[32P]pCp 等的标记、单链 Oligo RNA 及 Oligo DNA 的合成、tRNA 的特别修饰、在蛋白质中引入非天然氨基酸等。
T4 RNA 连接酶 1 来源于大肠杆菌表达，表达基因为 T4 噬菌体。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| T4 RNA 连接酶 1 | HBP001101 | 1000 U/100 μL |
| HBP001102 | 5000 U/500 μL |
产品组分
| 组分 | HBP001101 | HBP001102 |
| T4 RNA 连接酶 1（10 U/μL） | 100 μL | 500 μL |
| 10× Reaction Buffer | 300 μL | 1500 μL |
| ATP（10 mM） | 200 μL | 1000 μL |
| PEG 8000（50%，RNase free） | 500 μL | 2500 μL |
| DEPC-treated Water | 1 mL | 5 mL |
储存缓冲液
Storage Buffer：10 mM Tris-HCl（pH 7.4），50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol。
10× Reaction Buffer：500 mM Tris-HCl（pH 7.5），100 mM MgCl2，10 mM DTT。
活性定义
在 37℃下，在 5′末端浓度为 10 μM 时，在 30 min 内催化 1 nM 的 5′-[32P]rA16 形成抗磷酸酶形式所需酶的量被定义为一个单位。
质量控制
1. 无 RNase、DNase 污染。
2. 经考马斯亮蓝染色的 SDS-PAGE 判断，纯度>90%。
反应体系和条件
1. 对于单链 RNA 的环化连接反应，请按下表配制反应体系：
| 组分 | 体积 | 反应终浓度 |
| DEPC-treated Water | Up to 20 μL | / |
| ssRNA | X μL | 0.5 μM |
| 10× Reaction Buffer | 2 μL | 1× |
| ATP（稀释为 1 mM） | 1 μL | 50 μM |
| T4 RNA Ligase 1（10 U/μL） | 1 μL | 0.5 U/μL |
| Total | 20 μL | / |
2. 对于单链 RNA 或 DNA 的分子间连接反应，请按下表配制反应体系：
| 组分 | 体积 | 反应终浓度 |
| DEPC-treated Water | Up to 20 μL | / |
| ssRNA | X μL | 0.5 μM |
| 10× Reaction Buffer | 2 μL | 1× |
| ATP（10 mM） | 1 μL | 500 μM |
| PEG 8000（50%，RNase free） | 8 μL | 20% |
| T4 RNA Ligase 1（10 U/μL） | 1 μL | 0.5 U/μL |
| Total | 20 μL | / |
3. 37℃孵育 30 min。如果发现效果欠佳可以尝试 25℃孵育 2 h 或 16℃孵育 16 h。为了使连接反应更加充分，可以适当延长反应时间。
注意：
1. 由于涉及 RNA 操作，需要严格按照 RNA 操作的规范进行，避免 RNase 污染，相关试剂和耗材需要满足 RNase free。由于涉及单链 RNA，可以考虑适量添加 RNase 抑制剂，推荐反应终浓度为 1～2 U/µL，即使不添加 RNase 抑制剂时也可以获得良好的连接效果。
2. 上述体系中 ssRNA 的用量已经较大，对于样品较少的情况，可以减少 ssRNA 的用量。
3. 根据连接反应的类型，推荐在反应体系中加入适量的 PEG 8000。建议连接单链 RNA 或 DNA 的分子间连接反应体系中 PEG 8000 的终浓度为 15%～25%，这样既不影响反应特性也可以显著提高酶活性。
4. 酶失活或抑制：65℃加热 15 min 或煮沸 2 min 可使其失活，或加入 10%体积的 0.5 M EDTA（pH 8.0）也可终止反应。
注意事项
1. 本产品连接的底物无论是单链 RNA 还是单链 DNA，都需要确保 5′末端磷酸化或腺苷酰化，同时 3′末端是羟基。
2. 如果连接底物为双链 RNA 或 DNA，推荐使用 T4 RNA Ligase 2。
3. 可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如 RNase 抑制剂和 DEPC 水等。
4. 本试剂盒提供的 ATP 浓度为 10 mM，请根据实际操作进行稀释使用。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
