T4 RNA 连接酶 2，GMP Grade 是一种 ATP 依赖的双链 RNA 连接酶，具有 RNA 链分子间和分子内连接活性。与 T4 RNA Ligase 1 相比，该酶对双链 RNA 切刻的连接活性要明显高于对单链 RNA 的末端连接，且需要 5′磷酸基和 3′羟基相邻才能连接。此外，该酶还能在双链结构中，连接 RNA 的 3′羟基和 DNA 的 5′磷酸基。
本品采用符合 GMP 规范的生产与质量管理体系，保证生产过程以及原辅料全程可追溯。整个生产过程不使用抗生素和任何动物来源的原料及辅料，对宿主蛋白、外源 DNA、非特异性内切酶、DNase、RNase 等工艺相关杂质，以及微生物限度、细菌内毒素等进行严格控制。本品满足疫苗与药物生产等领域对原辅料的要求。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| T4 RNA 连接酶 2，GMP Grade | HSM060221-01 | 1000 U |
| HSM060221-02 | 5000 U |
产品组分
| 组分 | HSM060221-01 | HSM060221-02 |
| T4 RNA 连接酶 2，GMP Grade（10 U/µL） | 100 µL | 500 µL |
| 10× T4 Rnl2 Buffer，GMP Grade | 1 mL | 2×1 mL |
活性定义
1 个活性单位（U）是指在 37℃下，30 min 内连接 0.4 µg 23-mer 和 17-mer RNA 的等摩尔混合物所需的酶量。
失活条件
80℃，5 min。
质量控制
蛋白纯度：经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白检测纯度不低于 95%。
内切酶活性：37℃下，在 20 µL T4 Rnl2 Buffer，GMP Grade 反应体系中将 10 U T4 RNA 连接酶 2，GMP Grade 与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 10%的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性：37℃下，在 20 µL T4 Rnl2 Buffer，GMP Grade 反应体系中将 10 U T4 RNA 连接酶 2，GMP Grade 与 15 ng 双链 DNA 片段共同温育 16 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
RNase 活性：37℃下，在 10 µL T4 Rnl2 Buffer，GMP Grade 反应体系中将 10 U T4 RNA 连接酶 2，GMP Grade 与 500 ng RNA 共同温育 1 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，不低于 90%的 RNA 仍保持完整。
磷酸酶活性：200 µL 反应体系中加入 100 U 本酶和 2.5 mM p-Nitrophenyl Phosphate（PNPP），37℃孵育 4 h，碱性磷酸酶活性<0.0001 U。
宿主 DNA 残留：采用中国药典 2025 版四部通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法定量 PCR 法，本品中大肠杆菌宿主细胞 DNA 残留量<10 拷贝/100 U。
宿主蛋白残留：采用中国药典 2025 版四部通则 3412 大肠埃希菌菌体蛋白质残留量测定法，本品中大肠杆菌菌体蛋白质残留量低于 50 ppm。
微生物限度检测：采用中国药典 2025 版四部通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法，本品需氧菌总数≤1 cfu/mL，霉菌和酵母菌总数≤1 cfu/mL。
细菌内毒素残留：采用中国药典 2025 版四部通则 1143 细菌内毒素检查法第一法凝胶法，本品中细菌内毒素残留低于 0.25 EU/KU。
支原体检测：采用支原体检测试剂盒（LAMP 法）检测 10 U T4 RNA 连接酶 2，GMP Grade，结果为阴性。
重金属残留：采用中国药典 2025 版四部通则 0821 重金属检查法第一法，本品重金属残留低于 10 ppm。
使用方法
1. dsRNA 切刻的连接
（1）RNA 底物制备：用 65℃，3 min 预处理 RNA 底物（切刻 dsRNA），冰浴 2 min。
（2）在冰上配制如下反应体系：
| 组分 | 添加量 | 终浓度 |
| 10× T4 Rnl2 Buffer，GMP Grade | 2 µL | 1× |
| T4 RNA 连接酶 2，GMP Grade（10 U/µL） | 1 µL | 0.5 U/µL |
| 切刻 dsRNA（10 µM） | 2 µL | 1 µM |
| Nuclease-Free Water | up to 20 µL | / |
（3）充分混匀并瞬离后，25℃温育 1 h。
（4）反应结束后，向产物中加入蛋白酶 K 或 EDTA 以终止反应。
注意事项
1. 本品所附的 10× T4 Rnl2 Buffer，GMP Grade 适用于连接双链 RNA 切刻。Buffer 的 Mg2+终浓度为 2 mM，如要连接 RNA/DNA 杂合链切刻，可适当提高 Mg2+浓度（不超过 10 mM），或添加 10~15%的 PEG 8000。
2. 为防止 RNase 污染，可以添加 RNase 抑制剂，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase free。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套及口罩进行实验操作。
