T7 Endonuclease I（T7 Endo I,T7EI），中文名称 T7 核酸内切酶 I，可识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构 DNA、Holliday 结构或 DNA 分叉点、异源双链 DNA，切割位点位于错配位点 5′端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。此外 T7EI 也能以很慢的速度切割含有缺刻的双链 DNA。值得注意的是，T7EI 可以识别长度大于或等于 2 个碱基对（bp）的插入、缺失或突变导致的 DNA 错配，但不能识别 1bp 的插入、缺失或突变。同时，T7 Endonuclease I 无法识别所有的 DNA 错配，对 C 错配的切割效果最佳。本品为克隆重组 T7 Endonuclease I 基因后在大肠杆菌中表达纯化获得的高纯度蛋白，不含其他内切酶或外切酶污染。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
| T7 核酸内切酶 I | HSM060111-01 | 250 U |
| HSM060111-02 | 1250 U |
产品组分
| 组分 | HSM060111-01 | HSM060111-02 |
| T7 Endonuclease I（10 U/μL） | HSM060111A 25 μL | HSM060111A 125 μL |
| 10× Cut Buffer G | HSM060111B 1.25 mL | HSM060111B 1.25 mL |
| Control Template（T7EI） | HSM060111C 20 μL | HSM060111C 20 μL |
活性定义
1 活性单位是指在 50 μL 体系中，37℃反应 1 h，将 1 μg 超螺旋十字形结构 pUC（AT）的 90%以上转换为线性结构所需的酶量。
质量控制
蛋白纯度：经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性：在 20 μL 反应体系中将 10 U T7 Endonuclease I 与 200 ng 的质粒 DNA 在 37℃共同温育 2 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%超螺旋质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性：DNase 活性在 20 μL 反应体系中将 10 U T7 Endonuclease I 与 15 ng 的双链 DNA 片段在 37℃共同温育 2 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA 片段无变化。
产品应用
1. 基因突变、SNP、TALENCRISPR/Cas9 形成的突变体检测。
2. 检测或切割异源双链 DNA 和切刻的 DNA。
3. 随机切割线性 DNA 进行鸟枪法克隆。
使用方法
1.配制退火反应体系：
| 试剂 | 实验组 | 阴性对照 1 | 阴性对照 2 | 阳性对照 |
| PCR 产物（Wild Type） | 200 ng | 200 ng | / | / |
| PCR 产物（Mutant） | 200 ng | / | 200 ng | / |
| Control Template（T7EI）a | / | / | / | 2 μL |
| 10× Cut Buffer G | 2 μL | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| Nuclease-Free Water | Up to 19 μL | Up to 19 μL | Up to 19 μL | Up to 19 μL |
a. Control Template 为突变型和野生型 PCR 产物 1:1（各 100 ng）的混合物，使用前需退火成含不配对的杂合链。退火后经 T7EI 酶切产生 620 bp 和 175 bp 条带。
2. 使用 PCR 仪退火
| 温度 | 时间 |
| 95℃ | 5 min |
| 95℃~85℃ | -2℃/s |
| 85℃~25℃ | -0.1℃/s |
| 4℃ | ∞ |
3.T7 Endonuclease I 酶切
| 试剂 | 加入量 |
| “步骤 1”的退火反应产物 | 19 μL |
| T7 Endonuclease I（10 U/μL） | 1 μL |
1）37℃反应 15~30 min；
2）85℃加热 15 min 或加入 1.5 μL 的 0.25 M EDTA 终止酶切反应。
4.将酶切产物使用 2%的琼脂糖凝胶进行电泳检测
注意事项
1. T7 Endonuclease I 具有底物结构选择性，以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时必须控制酶量和反应时间以达到最佳酶切效果。
2. 反应温度超过 42℃时会使 T7 Endonuclease I 非特异性核酸酶活性增强，超过 55℃会导致酶活下降。
3. Mn2+会显著增加 T7 Endonuclease I 非特异性核酸酶活性，请使用不含 Mn2+的 PCR Buffer 进行 PCR 扩增。
4. T7 Endonuclease I 可兼容多种 PCR Buffer，PCR 产物可不经过纯化直接用于酶切检测，若酶切结果异常，可以将 PCR 产物纯化后再进行实验。
