本试剂盒用于定量检测样本中T7RNA聚合酶的含量。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| T7 RNA 聚合酶残留检测试剂盒（ELISA 法） | HBP006002 | 96T |
| HBP006003 | 48T |
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法原理，酶标板微孔中包被抗 T7RNA 聚合酶抗体，加入样本和辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体孵育，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，经酸的终止作用转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中 T7RNA 聚合酶含量呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），根据标准曲线计算样品中T7RNA 聚合酶的浓度。
试剂盒组成
| 组分名称 | HBP006002 | HBP006003 |
|---|---|---|
| 反应板 | 96T | 48T |
| 浓缩标准品（0.1mg/mL） | 0.05mL | 0.025mL |
| 酶结合物（100X） | 0.06mL | 0.03mL |
| 样本稀释液 | 30mL | 15mL |
| 酶结合物稀释液 | 6mL | 3mL |
| 浓缩洗涤液 10X | 30mL | 15mL |
| 显色液 | 12mL | 6mL |
| 终止液 | 6mL | 3mL |
| 封板膜 | 4 张 | 2 张 |
| 说明书 | 1 份 | 1 份 |
| COA | 1 份 | 1 份 |
储存条件及有效期
1、2~8℃储存 12 个月。
所需仪器
1、酶标仪（含 450nm 波长滤光片，建议含有双波长检测模式，主副波长分别为 450nm和 650nm）。
2、微孔板振荡器（400-600rpm）。
检测流程图
试剂准备
1、所用试剂组分在使用前需要于室温（25°C ±2℃）平衡 20min,使用后需要立即放回2-8℃保存。
2、浓缩洗涤液 10×用纯化水按 1：9 体积比稀释成洗涤工作液。
3、浓缩标准品（0.1mg/ml）用样本稀释液稀释至 32ng/mL、16ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、 2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0ng/mL，稀释方法建议如下：终浓度稀释方法编号（ng/mL） 样本稀释液工作标准品加量A0 1000 0.198mL 2μL浓缩标准品A 32 0.387mL 12.8μLA0 B 16 0.2mL 0.2mLA溶液C 8 0.2mL 0.2mLB溶液D 4 0.2mL 0.2mLC溶液E 2 0.2mL 0.2mLD溶液F 1 0.2mL 0.2mLE溶液G 0.5 0.2mL 0.2mLF溶液H 0 0.2mL /
4、100×酶结合物用酶结合物稀释液作 100倍稀释后使用。
| 编号 | 终浓度（ng/mL） | 稀释方法 | |
|---|---|---|---|
| 稀释液 | 工作标准品加量 | ||
| A0 | 1000 | 0.198mL | 2μL 浓缩标准品 |
| A | 32 | 0.387mL | 12.8μL A0 |
| B | 16 | 0.2mL | 0.2mL A 溶液 |
| C | 8 | 0.2mL | 0.2mL B 溶液 |
| D | 4 | 0.2mL | 0.2mL C 溶液 |
| E | 2 | 0.2mL | 0.2mL D 溶液 |
| F | 1 | 0.2mL | 0.2mL E 溶液 |
| G | 0.5 | 0.2mL | 0.2mL F 溶液 |
| H | 0 | 0.2mL | / |
检测步骤
1. 从室温平衡后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 2~8℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，建议所有标准品和待测样本进行双复孔测定。先按照 50uL/孔加入 1X 的酶结合物溶液，再按照 50uL/孔加入标准品和样本。
*当不能确定待测样本中 T7 RNA 聚合酶含量时，建议使用样本稀释液对样本进行多个稀释倍数稀释（稀释 4 倍、8 倍、40 倍、200 倍），根据第一次检测的数值，确定样本的稀释倍数。如果确定了样本的稀释倍数，使用样本稀释液稀释样本，进行检测。保证代入标曲计算值在线性范围内（0.25-32ng/ml）。
3. 用封板膜封住反应孔，37℃振板（500rpm）反应 60min。
4. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（300μL），静置 15~30s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 3 次。
5. 每孔加入显色剂 100uL，用封板膜封住反应孔，37℃静置避光反应 15min。
6. 每孔加入终止液 50μL，立即进行检测，设定酶标仪波长于 450nm 处（建议用双波长450nm/650nm）。
检测结果的解释
1. 计算标准品、空白对照、样本的平均光吸收值。以标准品浓度为横坐标，标准品光吸收平均值为纵坐标绘制标准曲线。（双波长检测模式下的光吸收值为 450nm 减去 650nm）
2. 采用四参数方式拟合校准曲线。
检测性能
1、检出限：＜0.1 ng/mL
2、检测低限：0.25 ng/mL
3、线性范围：0.25~32 ng/mL
4、精密度：批内变异系数≤10%，批间变异系数≤15%
5、回收率：80%~120%
6、特异性：只特异性识别 T7 RNA 聚合酶，其他 IVT 工具酶对测值无干扰
注意事项
1. 显色温度和时间对实验结果至关重要，应准确把握。
2. 洗涤过程中应使洗涤液浸泡反应板 15~30 s后再甩干，以充分洗涤非特异性吸附的成分。
3. 所有试剂使用前应充分摇匀，加样时应将所加物加入酶标板孔中底部，避免加在孔壁上部，加样时注意不可溅出，不可产生气泡。
4. 若发现浓缩洗涤液中有结晶，可在 37℃水浴锅中孵育，待结晶完全溶解后再混匀稀释至工作浓度。
5. 样本中应避免引入叠氮钠（NaN3），叠氮钠会破坏辣根过氧化物酶活性，使检测值偏低。
6. 不同批次组分的试剂不可以混用，移液器枪头不可混用，避免交叉污染。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴好手套进行实验操作。
8. 本产品仅供科学研究使用，不得用于临床医学诊断及其他非合理用途。
