产品描述
PNGase F是从糖蛋白中去除几乎所 N-糖链的最有效的方法。PNGase F是一种酰胺酶, 切割糖蛋白上的 N-连接糖链。切割的糖型有: 高甘露糖、杂合和复杂寡糖;切割位点为:最内侧的 N-乙酰葡糖胺和天冬酰胺之间的糖苷键。
技术指标
外观 | 无色液体 |
蛋白纯度 | ≥95%(SDS-PAGE) |
比活性 | ≥500,000 U/mL |
糖苷外切酶 | 无 |
糖苷内切酶 F1 | 无 |
糖苷内切酶 F2 | 无 |
糖苷内切酶 F3 | 无 |
糖苷内切酶 H | 无 |
蛋白酶 | 无 |
酶学性质
来源 | 微生物 |
分类 | EC 3.5.1.52 |
分子量 | 35 kDa (SDS-PAGE) |
等电点 | 8.14 |
最适 pH | 7.0-8.0 |
最适温度 | 65℃ |
底物选择性 | 水解蛋白质的 Asn 相连的 N-糖链,使 N-聚糖保持完整。 图1 |
糖蛋白水解位点 | 除含α1-3 岩藻糖苷键外,能切割所有N-糖链。 图12 |
激活剂 | DTT |
抑制剂 | SDS |
储存温度 | -25~-15℃ |
失活条件 | 含 1μL PNGase F 的 20 μL 反应,混合物在 75 °C 孵育 10min 即可失活。 |
图1.PNGase F 的底物特异性
图 2. PNGase F 的识别位点。当内部的 GlcNAc 残基与 α1-3 岩藻糖残基连接时,PNGase F 不能从糖蛋白切割 N-糖链。这种修饰常见于植物和一些昆虫糖蛋白。
用于从糖蛋白中去除N-糖链。
酶活定义
单位酶活定义为在下述条件下,10μL的反应 体系中,37 °C 反应1小时从 10μg变性RNase B中除去超过 95%的碳水化合物所需 要的酶量。