肽N-糖苷酶F是从糖蛋白中去除几乎所有N-糖链的最有效的方法。肽N-糖苷酶F是一种酰胺酶,切割糖蛋白上的N-连接糖链。切割 糖型有:高甘露糖型、杂合型和复杂型,切割位点为最内侧的N-乙酰葡糖胺和天冬酰胺之间的糖苷键。通常使用肽N-糖苷酶F水解释放抗体N-糖链需要几个小时的孵育时间,然后进行聚糖衍生和液相色谱或质谱分析。若去糖基化不完全,获得的糖链分布不能代表治疗性抗体的正确组成。
肽N-糖苷酶F(高浓版)是一种改进的试剂,可以在几分钟内完成抗体和融合抗体的快速去糖基化。所有的N-糖链都能快速无偏好地释 放出来,并准备好进行下游色谱或质谱分析,进而快速的对糖基化抗体确定糖型。
外观 | 无色透明液体 |
糖苷外切酶 | 无检出 |
糖苷内切酶F1 | 无检出 |
糖苷内切酶F2 | 无检出 |
糖苷内切酶F3 | 无检出 |
糖苷内切酶H | 无检出 |
蛋白酶 | 无检出 |
酶学性质
来源 | 微生物 |
分类 | EC 3.5.1.52 |
分子量 | 35kDa(SDS-PAGE) |
等电点 | 8.14 |
最适pH | 7.0-8.0 |
最适温度 | 65℃ |
底物选择性 | 水解蛋白质的Asn相连的N-糖链,使N-聚糖保持完整 |
抗体水解位点 | 完整地水解糖基化抗体的糖链 |
激活剂 | DTT |
抑制剂 | SDS |
储存温度 | -25~-15°C |
失活条件 | 含1μL肽N-糖苷酶F(高浓版)的20μL反应混合物在75°C孵育10min即可失活 |
用途
用于糖基化抗体的快速去糖基化,分离纯化的糖链可用于后续的质谱鉴定抗体的糖型。
货号 | HBP003013-1 | HBP003013-2 | HBP003013-3 |
PNGaseF (High concentration) | 45µL | 180µL | 1000µL |
PNGaseF缓冲液 | 500µL | 1000µL | 5000µL |