TEV Protease (with His-tag) 来源于烟草蚀纹病毒，经基因工程改造并在大肠杆菌中重组表达获得，在保留天然 TEV 酶功能活性的同时，提高了其对 pH 和温度的耐受性。TEV Protease 是一种高度特异性的半胱氨酸蛋白酶，常用于切除融合蛋白上的亲和标签。TEV Protease 严格识别七氨基酸序列 EXXYXQ↓ (G/S)，并在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间进行切割，常用的七氨基酸序列是 Glu-Asn-Leu Tyr-Phe-Gln ↓ -Gly。 TEV Protease (with His-tag) N 端带有 His 标签，使其可以在酶切完成后通过 Ni 亲和层析去除，以达到纯化目的蛋白的目的.
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| TEV蛋白酶（His标签） | HSC090031 | 1000U |
产品组分
| 产品组分 | HSC090031 |
|---|---|
| TEVProtease (10U/μL) | HSC090031-A 100 μL |
| 10× TEV Buffer | HSC090031-B 1mL |
酶活定义
1 活性单位 (U) 定义为在1× TEVBuffer中， 30℃反应 1 h，剪切>85%的 3 μg 底物所需要的酶量。
储存缓冲液
50 mM Tris-HCl；250 mM NaCl；10 mM DTT； 1mM EDTA；50% Glycerol；pH 7.5 @ 25℃。
质量控制
• 蛋白纯度检测：使用 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。
• 非特异性蛋白酶活性检测：30℃下，在 50 μL 反应体系中将 10 U TEV Protease (with His-tag) 与 3 μg 标准蛋白共同温育 1 h，通过 SDS-PAGE 检测蛋白质混合物没有降解。
运输及保存方法
干冰运输。-25~-15 ℃ 保存。注：建议在首次使用时分装保存，避免反复冻融。
使用说明
1. 在 EP 管中配制如下反应体系：
| 试剂 | 使用量 |
|---|---|
| 底物 | 20 μg |
| 10× TEV Buffer | 5 μL |
| TEVProtease(10U/μL) | 1 μL |
| ddH2O | Upto50 μL |
2. 30℃孵育 1 h 或 4℃过夜（16 h 左右）；
3. 向上述 EP 管中加入 16 μL Protein Loading Buffer (SDS, 4×)，样品煮沸 10 min，取 10 μL 进行 SDS-PAGE 分析；
4. 根据酶切结果，优化 TEV 酶的用量、孵育温度和孵育时间来确定最佳的反应条件。
注意事项
• 可兼容常见蛋白酶抑制剂，如：抑肽酶、苯甲脒、亮抑酶肽、胃蛋白酶抑制剂、PMSF等。
• 可兼容 400 mM 咪唑、2 M 尿素、0.2 M NaCl、10 mM MgSO4、10 mM MnCl2、10 mM CaCl2 和高达 100 mM 的 EDTA。
• 该酶在有≥40%甘油、≥ 5 mM Zn 2+、≥1 mM Cu 2+ 和 ≥10 mM Co 2+ 的反应体系活性会受到抑制。
• TEV 最佳反应条件为 pH7.0、30℃，但在pH6~9、4~37℃范围内均有活性，可根据目的蛋白的情况自行选择适宜的反应条件。
