热稳定无机焦磷酸酶(Thermostable Inorganic Pyrophosphatase)来源于极端嗜热菌(Thermococcus litoralis),经大肠杆菌重组表达纯化后获得,可催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐:P2O74- + H2O + PPase → 2HPO42-。与 Pyrophosphatase Inorganic (Yeast)(货号:HBP000501)相比,本品更加耐热,在 100℃ 加热 4 h 仍具有 100% 活性,因此除体外转录以外,还可用于高温的聚合反应,例如 PCR、LAMP 等。
产品信息
| 产品名称 | 货号 | 包装规格 |
| 热稳定无机焦磷酸酶 | HSM110001 | 200 U |
产品组分
| 组分 | 规格 |
| Thermostable Inorganic Pyrophosphatase (2 U/μL) | 100 μL |
运输及保存方法
-25~-15℃运输与保存,有效期两年。
活性定义
1 单位指在标准反应条件下(0.5 mL 反应体系,50 mM Tris-HCl (pH 8.5)、1 mM MgCl2、0.32 mM PPi,75℃ 反应 10 分钟),每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐所需的酶量。
产品应用
1. 体外转录:提高体外转录中 RNA 的产量。
2. DNA 合成:提高 PCR、LAMP 等过程的 DNA 产量。
3. 催化无机焦磷酸盐转化为正磷酸盐。
质量控制
蛋白纯度:经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测,蛋白纯度不低于 95%。
非特异性内切酶活性:37℃ 下,在 20 μL 反应体系中将 2 U Thermostable Inorganic Pyrophosphatase 与 200 ng 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于 20% 的质粒 DNA 转变成缺刻或线性状态。
DNase 活性:37℃ 下,在 20 μL 反应体系中将 2 U Thermostable Inorganic Pyrophosphatase 与 15 ng 双链 DNA 片段共同温育 16 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,双链 DNA 片段无变化。
RNase 活性:37℃ 下,在 10 μL 反应体系中将 2 U Thermostable Inorganic Pyrophosphatase 与 500 ng RNA 共同温育 1 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,超过 90% 的 RNA 保持完整。
宿主 DNA 残留:采用中国药典 2025 版四部通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法定量 PCR 法,本品中大肠杆菌宿主细胞 DNA 残留量低于 1 拷贝/2 U。
注意事项
1. 本产品无法热失活。
2. 该酶在多种反应 Buffer 中均具有活性,通常在 PCR、LAMP 等实验中直接加入即可。
3. 该酶的用量在不同的实验中需要优化,通常在 0.05~2 U/mL 浓度范围内调整。
